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近十年来,我国北方多个省份发生了大面积的黄瓜细菌性流胶病,对当地的农民造成了严重的经济损失。本文对引起该病的病原菌进行了鉴定,建立了两套病原菌快速检测体系,并应用到土壤、水体和病残体中病原菌的检测,主要的研究结果如下:(1)明确了引起我国黄瓜细菌性流胶病的病原菌。对山东、山西、河南、河北、辽宁、北京等6个省市的96个温室进行的病害调查,采集黄瓜细菌性流胶病样本316份,通过分离、纯化和柯赫氏法则验证,共获得病原菌125株。经过形态学、生理生化鉴定和分子生物学鉴定,明确了引起该病的病原菌分别为丁香假单胞流泪致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans,Psl)和胡萝卜软腐果胶杆菌巴西亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.brasiliense,Pcb),其中Pcd引起的黄瓜细菌性茎软腐病在中国属于首次报道,而Psl引起的黄瓜细菌性角斑病是导致黄瓜流胶现象的主要病害,Psl占据全部病原菌的66%。(2)建立了基于叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)结合荧光定量PCR(PMA-qPCR)的Psl活细胞定量检测体系。通过处理条件的优化,选择终浓度为60 μmol/L的PMA进行预处理。对菌悬液中活体Psl的最低检测阈值为3.25×102 CFU/mL,而对于带菌种子中病原菌的检测阈值为9.5 CFU/g。对于田间采集的37个种子样品,有9个样品被检测出携带有病原菌,并且带菌量为103-104CFU/g。上述结果表明,PMA-qPCR是一种快速、可信的用于定量检测菌悬液以及带菌种子中病原菌活细胞的方法,对于提高该病害的防控措施具有潜在的应用价值。(3)建立了基于环介导等温扩增的Psl快速检测体系。基于hrpZ基因的保守序列设计了 6条特异性引物用于LAMP扩增,通过优化反应条件,LAMP扩增的最适温度设为67℃,LAMP结果通过钙黄绿素实现自然光下可视化检测。LAMP可以特异性的针对Psl进行扩增,而对非目的菌株的检测结果为阴性。灵敏性检测表明,LAMP对Psl菌悬液检测的最低浓度为104 CFU/mL。该方法还被用于检测受到感染的黄瓜叶片中,即使是发病初期的叶片也可以获得检测。此外,该方法适合于对田间的疑似受到Psl侵染的样品直接进行检测,不需要进行菌株的富集和DNA提取,因此具有在田间进行应用的能力。(4)应用PMA-qPCR研究了土壤、病残体以及水体中Psl的动态变化。Psl可以在病残体中长期存活,在保湿的土壤中以及保湿土埋藏的病残体内的Psl死亡率更高,并且可以在无营养的水体中长时间保持生物活性。因此,应当避免将病残体长期留存于温室内,造成病害的二次传播;土壤翻耕前进行适当灌水可以促使土壤中病残体腐烂,有利于消除土壤中的Psl;温室内应当尽量保持较低的湿度,以切断病原菌通过水进行传播的途径。