杏鲍菇子实体多糖对壬基酚诱导的小鼠肝脾损伤的修复作用

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杏鲍菇(Pleurotus eryngii)隶属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricales)、侧耳科(Pleurotaceae)、侧耳属(Pleurotus),又名刺芹侧耳、刺芹菇,被誉为“草原上的美味牛肝菌”,兼具食用、药用价值。杏鲍菇的子实体营养价值丰富,有促消化、降血压、降血脂、降胆固醇、抗病毒、抗肿瘤、增强机体免疫力等多种功效。本课题运用Plackett-Burman(PB)试验和响应面法(Response surface methodology,RSM)优化了杏鲍菇子实体多糖(P.eryngii fruiting body polysaccharide,PEBP)的提取条件,分析了PEBP的分子量、单糖组成等结构,检测了PEBP的体外抗氧化能力,验证了PEBP对壬基酚(Nonylphenol,NP)诱导的小鼠肝脾损伤的修复作用。主要结果如下:(1)PEBP的提取条件优化。提取温度80℃,提取时间3h,料液比1:50(g/ml),乙醇浓度86.84%,醇沉时间17.86h时,多糖得率1.99%。为操作方便,将上述条件参数取整后,理论得率是1.99%,实际得率为1.92±0.15%。(2)PEBP的结构分析。经凝胶渗透色谱(Gel permeation chromatography,GPC)分析显示PEBP的重均分子量(Weight-average molecular weight,Mw)为2.22×10~5Da。由高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)分析得到PEBP主要含有4种单糖,分别是岩藻糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其质量百分比为2%、1.75%、2.59%和93.66%,摩尔比为8.8:1.0:10.0:58.1。傅立叶红外光谱(Fourier-transform infrared spectroscopy,FT-IR)检测和核磁共振波谱法(Nuclear magnetic resonance spectroscop-y,NMR)检测同时显示PEBP具备典型的吡喃型多糖特征,是由β型糖苷键连接的吡喃型多糖。(3)PEBP的体外抗氧化能力分析。当PEBP溶液浓度为1000μg/m L时,PEBP对超氧阴离子、羟基自由基和DPPH自由基的清除能力分别为42.58±2.88%和50.76±2.56%,还原力为1.69±0.19,说明PEBP具有良好的体外抗氧化能力。(4)PEBP对NP诱导的小鼠肝脾损伤的修复作用。(1)血清成分中谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)水平明显降低。(2)动物试验结果显示,高剂量PEBP(400mg/kg)显著增强小鼠肝脾组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,降低脂质过氧化产物丙二醛(Malondiadehyde,MDA)含量。(4)ELISA法检测结果显示,PEBP显著降低了小鼠细胞凋亡蛋白bac表达,提高了bcl-2蛋白水平,降低了COX-2含量,缓解了NP暴露引起的炎症反应。(3)免疫组化法检测结果显示,PEBP促进了抗炎症细胞因子IL-6的表达,缓解肝脏、脾脏炎症反应。(5)小鼠肝脾组织病理学观察用苏木精-伊红(Hematoxylin and eosin,H&E)染色表明PBPE能够改善小鼠的炎症程度,对机体具有保护效应。上述结果说明PEBP具有抗氧化、抗炎症及缓解细胞凋亡作用,能在一定程度上缓解NP毒性进而保护肝脾组织,给天然抗炎、护肝脾药物的研发提供了理论依据和参考思路。
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