人体主要有两大抗凝系统，分别为抗凝血酶（antithrombin,AT）系统（包括抗凝血酶和肝素，主要抑制具有丝氨酸蛋白酶活性的凝血因子，如：FXa，凝血酶等）和蛋白C（protein C,PC）系统（包括蛋白C,蛋白S,血栓调节蛋白,内皮细胞蛋白C受体等，主要灭活凝血因子Ⅴ和Ⅷ等）。而抗凝血酶系统中的抗凝血酶是人体最重要的抗凝因子之一，约占抗凝活性的70%。1965年Egeberg O[1].在报道一个家族性抗凝血酶缺陷症时第一次提出易栓症（thrombophilia）一词，意为血栓极易形成状态，之后许多年内，这种抗凝血酶缺陷症成为遗传性抗凝系统功能性障碍的代称。1981年由Griffin J H等首次报道了遗传性蛋白C缺陷症；随后，在1984年时，发现并报道了遗传性蛋白S（protein S,PS）缺陷症[2-5]。目前国际上已报道的AT基因突变总计218种以上，报道的AT缺陷家系不到300例；已报道的PC基因突变总计262种以上，报道的PC缺陷家系300多例；已报道的PS基因突变总计200种以上，报道的PS缺陷家系400多例。蛋白S是一种能够在在肝脏、巨核细胞和内皮细胞中合成的抗凝因子，其合成过程中依赖维生素K参与。PS的分子量为70kD，基因定位于3号染色体1区1带（3p11.1-3p11.2）,含有14个内含子和15个外显子，基因序列全长80kb。PS是一种辅助因子，能够辅助活化蛋白C(active protein C,APC)灭活FVa和FⅧa因子，并辅助APC能够在血小板和磷脂的表面结合，形成酶与底物的免疫复合物。PS在血浆中有结合状态和游离状态两种。游离状态是PS能够发挥活性的状态，约占总PS的35%；结合状态是PS能够与补体C4b结合蛋白（C4b-Bp）相结合，形成复合物而失去了辅助因子活性，约占总PS的65%。遗传性PS缺陷症是由于PS基因发生突变而引起PS的表达异常或功能异常的一种常染色体显性遗传病，其常引起患者多部位的反复的形成静脉血栓，如肠系膜静脉血栓、股静脉血栓、腓静脉血栓、甚至肺静脉血栓等，动脉血栓少见。PS缺陷症在临床上可分为三型：I型是PS含量的缺乏，但分子结构与分子功能正常；Ⅱ型是PS质的异常，分子结构发生改变，不能发挥抗凝作用；Ⅲ型是仅有PS活性部分即游离部分的减少，而总的PS含量基本正常。蛋白C是一种由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶原，合成原料需要依赖维生素K的参与，是人体抗凝系统的一种重要的抗凝因子。PC的分子量为62kD，定位于2号染色体，含有8个内含子和9个外显子，基因全长11.2kb。蛋白S与蛋白C、血栓调节蛋白（或称凝血酶调节蛋白）和内皮细胞蛋白C受体等一起组成蛋白C系统，参与人体的抗凝系统功能，在抗凝系统中发挥着重要作用。其能够以活化形式的蛋白C对FVa和FⅧa因子进行水解灭活使凝血过程中断，并减少FXa与FVa的结合而发挥抗凝作用。遗传性PC缺陷症是由于编码PC的基因发生突变的一种常染色体显性遗传病，可使APC生成障碍和FVa和FⅧa灭活障碍，而导致静脉血栓形成，最常见于下肢深静脉（如髂静脉）血栓等。遗传性PC缺陷症和遗传性PS缺陷症均可导致PC系统的异常，常引起多部位的、反复的静脉血栓形成，亦可见于动脉血栓形成，其临床表现十分复杂。抗凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶（serpins）抑制剂，主要具有抑制丝氨酸蛋白酶活性的凝血酶、FXa等因子，是人体重要的抗凝物质。抗凝血酶也称为抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）,由Seegers,Johnson和Fell在1950年代进行的早期科学研究中发现，依次命名了四种AT（分别为ATⅠ、ATⅡ、ATⅢ、ATⅣ）,但目前只发现ATⅢ有临床意义，通常用AT代指ATⅢ[1]。遗传性抗凝血酶缺陷症属于遗传性易栓症的其中一种，是由于抗凝血酶基因发生突变导致抗凝血酶表达异常或功能异常所引起的一种常染色体显性遗传病，在人群中的发病率为万分之二到万分之五[19-20]，中国人在静脉血栓栓塞症中的发病率为5.75%-7.14%[18]。抗凝血酶缺陷症是导致遗传性易栓症的主要因素之一，多数患者为基因杂合突变导致。目前发现的抗凝血酶基因突变中，错义或无义突变占56%，剪切位点突变占6%，碱基缺失或插入突变占37%，基因重排占1%。国内对抗凝血酶缺陷易栓症的研究相对较少，迄今共报道了11个抗凝血酶缺陷家系。遗传性抗凝血酶缺陷症在临床上可表现为极易反复形成人体某部位或多部位的静脉血栓，如肠系膜静脉血栓、髂静脉血栓、下肢深静脉血栓等，最常见部位为下肢深静脉血栓，有些情况下也可在肺部形成血栓导致肺栓塞；少数动脉血栓可形成心肌梗死、甚至脑梗死。通常情况下，AT缺陷人群在AT基因发生突变的遗传性因素作用下，发生静脉血栓栓塞症的风险比正常人群增加了数倍，但AT基因发生突变的人群不会完全都形成遗传性AT缺陷症，遗传性AT缺陷症的发生也同时受到获得性诱因的影响，如手术、创伤、长时间制动、高龄、恶性肿瘤、口服避孕药、妊娠等，在遗传性基因突变和获得性诱因并存的双重作用下，遗传性AT缺陷症的发生率将会明显增加。至今，国内研究报道的易栓症家系仍不多，本研究拟以两个易栓症家系进行研究，分析其抗凝血酶活性、蛋白C活性和蛋白S活性等进行表型诊断，检测其基因序列进行基因突变分析，以确定其所患易栓症的类型，并探讨基因诊断在易栓症类型诊断中的应用。目的1.对两个易栓症患者及其家系成员进行易栓症表型诊断和基因诊断，并探讨其家系成员发病机制。2.对两个易栓症患者及其家系成员的抗凝血酶基因进行基因测序和基因突变分析，并比对人类抗凝血酶基因突变数据库，以确定有无抗凝血酶基因相同位点突变的报道。方法1.收集两个家系资料，采集两个家系成员的血样标本。2.用发色底物法检测第一个家系9名成员和第二个家系4名成员的AT活性（AT：A）、蛋白S活性（PS：A）、蛋白C活性（PC：A）；AT抗原量（AT：Ag）检测采用免疫比浊法；同时检测其肝肾功能、凝血四项、D-D二聚体、狼疮抗凝物、抗心磷脂抗体等。3.用Western blot检测血浆中的AT分子量和含量。4.对两个家系成员的外周血进行全基因组DNA抽提，用PCR对AT基因的7个外显子及其侧翼序列进行扩增，经纯化后，用直接测序法对两个家系所有成员的扩增产物进行双向测序分析并进行基因突变检测。5.同时筛查100例正常人的AT基因相应位点序列并检索人类核苷酸多态性数据库（SNP）以排除基因突变的多态性；对两个家系先症者的FV基因的第10外显子和凝血酶原的第14外显子进行PCR扩增、产物测序，以排除FV Leiden突变和凝血酶原G20210A突变；对于突变位点查询人类抗凝血酶基因突变数据库进行查新检索。6.图像扫描，数据整理，数据分析。结果1.第一个家系的先症者AT：A和AT：Ag分别为48%和121mg/L，其AT基因的第6外显子发现10381T del，其家系9人中有5名成员检测到相同的缺失突变；2.第二个家系的患者AT：A和AT：Ag分别为52.1%和266mg/L，该家系其他成员的PC：A、PS：A、AT：A及AT含量等项目均正常，AT基因序列经突变分析未发现异常。结论第一个家系的先症者及部分成员存在Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症，是由AT基因10381T del引起的移码突变所致，经人类抗凝血酶基因突变库检索，未发现该位点突变的报道；第二个家系不存在AT基因突变，结合其他检测，患者诊断为获得性易栓症。