拳参抗溃疡性结肠炎有效部位制备工艺及其质量控制方法的研究

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本研究以蒙医常用药拳参为研究对象,观察拳参不同洗脱部位对TNBS诱导小鼠结肠损伤的影响,筛选出拳参抗溃疡性结肠炎的有效部位。建立了拳参抗溃疡性结肠炎有效部位的制备工艺,并对其进行了质量控制方法研究。1.通过文献检索,对溃疡性结肠炎的治疗现状及拳参的化学成分、药理作用和临床应用进行了综述。2.以昆明种小鼠为受试对象,利用TNBS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,对拳参不同的洗脱部位进行抗溃疡性结肠炎筛选,通过对正常对照组、模型组对照组、阳性(柳氮磺胺吡啶,SASP)对照组、80%乙醇提取物组、30%乙醇洗脱物组、60%乙醇洗脱物组、90%乙醇洗脱物组进行比较,以小鼠腹泻、便血、体重变化、肠重指数、组织病理学的改变等为评价指标,确定60%乙醇洗脱部位为抗溃疡性结肠炎有效部位。3.建立了拳参有效部位的制备方法。首先经正交实验考察优化了拳参有效部位的提取工艺,以总黄烷及绿原酸含量为指标,确定最佳提取工艺:80%乙醇浸渍48小时后,用8倍量80%乙醇以7mL/min进行渗漉。然后利用大孔树脂进行纯化,以总黄烷及绿原酸含量为指标进行系统考察,结果A型大孔树脂对有效部位中总黄烷及绿原酸富集率高,确定:洗脱溶剂为60%乙醇,上样液pH3,上样液浓度为0.3生药g/mL,树脂柱径高比为1:7,吸附流速为2 BV/h,洗脱流速为2 BV/h,洗脱体积为3 BV。4.建立了有效部位的质量控制方法。利用TLC及HPLC指纹图谱对拳参有效部位进行定性分析。采用香草醛-盐酸比色法对拳参有效部位中总黄烷进行了含量测定,以儿茶素为对照品,实验结果表明儿茶素在0.4~2.4 mg之间时线性关系良好,回归方程为:y=0.2570x-0.002,r~2=0.9996(n=5)。精密度、重复性、稳定性实验结果也均符合要求,测定有效部位总黄烷平均含量为62.6%,RSD为2.0%。采用HPLC法对拳参有效部位中绿原酸进行了含量测定,实验结果表明绿原酸在0.408~4.08μg范围时线性关系良好,y=5.6975×10~6x+1.0454×10~5(r2=0.9997),经测定有效部位中绿原酸平均含量为6.3%,RSD为2.8%。本法简单、快速、准确、专属性强,可为拳参有效部位质量控制方法。
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