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第一部分RREB1与APL分化的关系探讨目的:研究RREB1是否与APL细胞的分化密切相关。方法:用oncomine数据库分析RREB1mRNA在APL病人骨髓和健康成人的表达水平;定量PCR检测RREB1在各个髓系白血病细胞株的表达水平;用1μmol/L ATRA处理NB4和HL-60细胞72h后,western blot检测各组细胞RREB1、CD11b、CEBPβ的变化;间接免疫荧光观察RREB1在NB4和HL-60细胞的表达及分布情况。结果:RREB1在APL病人标本及APL细胞株高表达,且ATRA能明显抑制RREB1的表达。Western blot结果显示,ATRA处理APL细胞株72h后,CD11b、CEBPβ蛋白水平增加,而RREB1蛋白表达量明显下降;间接免疫荧光结果显示,RREB1主要分布在NB4和HL-60细胞核内,ATRA处理后其蛋白表达明显下调,但并不影响其定位。结论:RREB1在APL表达明显高于正常人,且ATRA能明显抑制其表达,表明RREB1很可能在APL的分化进程中发挥作用。第二部分RREB1通过对miR-145和ERK/CEBPβ通路的调节阻滞APL细胞株的分化目的:研究干扰RREB1基因表达对急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4、HL-60)分化的影响及其机制。方法:构建慢病毒对RREB1基因进行敲低,瑞氏染色检测细胞形态变化及分化情况;流式细胞术检测CD11b阳性细胞比例变化情况;western blot检测RREB1、CD11b、CEBPβ和pERK表达情况;实时荧光定量PCR检测miR-145表达情况。质粒转染对RREB1进行过表达,流式细胞术检测ATRA处理后各组细胞CD11b的表达变化。Western blot检测pERK的抑制剂和miR-145的抑制剂对稳转细胞株分化相关蛋白的影响。结果:在RREB1被成功敲低的情况下,瑞氏染色观察到NB4和HL-60细胞分化能力增强,表现为细胞核出现偏位和分叶趋势;流式细胞术检测到敲低RREB1后CD11b阳性细胞比例明显高于阴性对照组,western blot也检测到粒细胞分化标志蛋白CD11b和CEBPβ的表达上调,pERK的表达上调;实时荧光定量PCR检测到miR-145表达明显升高。且pERK抑制剂和miR-145抑制剂能够抵消敲低RREB1引起的分化增强,说明RREB1在APL中发挥着阻滞细胞分化的作用,且与RREB对miR-145和pERK/CEBPβ通路的抑制有关。结论:RREB1基因通过对miR-145和pERK/CEBPβ通路的调节影响APL细胞的分化。