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【研究背景和目的】高血压是最常见的慢性疾病之一,是心脑血管疾病发病和死亡的重要原因,高血压下的血管环境是造成内皮功能障碍的重要危险因素。内皮功能障碍是指可利用的一氧化氮代谢改变或几种内皮衍生的舒张和收缩因子失衡,这会加剧其他心血管疾病的发生以及进展。改善内皮功能是预防和管理高血压在内的心血管疾病的有效手段之一。AMPK是一种异三聚体丝氨酸/苏氨酸激酶,可以调节多种酶和底物,是细胞和机体代谢的关键调节器。AMPK在保护心血管方面发挥重要作用,是重要的治疗靶点。内皮中,激活的AMPK通过使e NOS磷酸化而促进NO的生成,并通过减少炎性细胞的黏附和迁移改善内皮损伤。中药丹参在预防和治疗心血管疾病方面取得较好的疗效,在临床上被广泛运用。丹参素钠是丹参的主要活性成分之一,具有舒张冠状动脉、抗氧化、抗炎、改善心肌缺血再灌注损伤等作用,但鲜有研究探讨丹参素钠改善内皮功能障碍的潜在机制。本研究将观察丹参素钠对内皮舒张功能和黏附的影响,并关注AMPK在其中的作用,尝试阐明其中的分子机制,为丹参素钠在心血管疾病的预防和治疗中提供更充分的实验依据。【研究方法】1.选取人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为研究对象,丹参素钠（12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM,400μM）处理细胞24h后,MTS检测丹参素钠对细胞的活力影响。2.丹参素钠（50μM和100μM）预处理HUVEC 12h后,使用Ang II（10μM）诱导12h构建内皮损伤模型,采用硝酸还原法检测细胞上清一氧化氮（NO）含量,采用ELISA法检测内皮素-1（ET-1）含量,采用Western Blot法检测血管舒张相关蛋白,探讨丹参素钠对内皮舒张功能障碍的影响。3.构建内皮损伤模型,利用单核-内皮细胞黏附实验和Western Blot法检测HUVEC内血管黏附相关蛋白,探讨丹参素钠对血管内皮黏附的影响。4.制备小鼠胸主动脉血管环,采用离体血管环试验和Western Blot法,检测丹参素钠对小鼠胸主动脉血管舒张功能和血管黏附分子的影响。5.采用分子对接和分子动力学技术观察丹参素钠与AMPK的关系。6.采用Western Blot法检测HUVEC和小鼠血管内丹参素钠与AMPK的关系。7.以HUVEC为研究对象,应用si-AMPKα1/α2干扰AMPK,通过硝酸还原法检测NO,采用Western Blot检测AMPK、p-AMPKα、e NOS、p-e NOS的蛋白表达,观察干扰AMPK对丹参素钠改善血管内皮舒张作用的影响。8.以HUVEC为研究对象,应用si-AMPKα1/α2干扰AMPK,通过单核-内皮细胞黏附实验,Western Blot检测VCAM-1、ICAM-1,观察干扰AMPK对丹参素钠改善血管内皮黏附作用的影响。9.以小鼠胸主动脉为研究对象,应用AMPK抑制剂干扰AMPK的磷酸化,采用离体血管环张力测试实验和Western Blot法,观察抑制AMPK对丹参素钠改善血管舒张作用的影响。10.以小鼠胸主动脉为研究对象,应用AMPK抑制剂干扰AMPK的磷酸化,采用Western Blot法检测VCAM-1和ICAM-1,观察抑制AMPK对丹参素钠改善血管黏附的影响。【结果】1.不同浓度（12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM,400μM）的丹参素钠处理HUVEC 24h后,MTS法结果显示,与对照组相比,丹参素钠促进HUVEC的增殖,差异有统计学意义（P<0.05）。2.在构建内皮损伤模型后,丹参素钠（50μM和100μM）预处理能够改善Ang II诱导的NO分泌的减少和ET-1释放的增加,丹参素钠促进e NOS的磷酸化水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.在构建内皮损伤模型后,与模型组相比,丹参素钠能够抑制单核细胞对HUVEC的黏附,并抑制黏附分子VCAM-1、ICAM-1以及核转录因子p-p65的磷酸化水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.在小鼠血管环张力测试中,与模型组相比,丹参素钠的处理能够提高血管的舒张率。在小鼠血管组织蛋白中,丹参素钠能够促进e NOS的磷酸化,抑制黏附分子VCAM-1、ICAM-1以及核转录因子p-p65,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.分子对接显示AMPK与SDSS之间有较强的结合能力,结合能量为-6.30kcal/mol;分子动力学结果表明AMPK与SDSS能够稳定结合。6.Western Blot显示丹参素钠能够在HUVEC和小鼠胸主动脉血管组织中激活AMPK,差异具有统计学意义（P<0.05）。7.RNA干扰AMPK后,部分阻断了丹参素钠对HUVEC舒张功能的改善作用,提示丹参素钠改善内皮舒张功能的作用可能是通过AMPK执行的。8.RNA干扰AMPK后,部分阻断了丹参素钠对抑制单核-内皮细胞黏附的作用,提示丹参素钠抑制黏附的作用可能是通过AMPK执行的。9.AMPK抑制剂的干扰下,部分阻断了小鼠血管内丹参素钠的舒张作用和抑制黏附的效果,提示丹参素钠在体内改善舒张和抑制黏附的作用可能是通过AMPK执行的。【结论】1.丹参素钠改善Ang II诱导的内皮舒张功能障碍,抑制单核-内皮黏附活动;2.丹参素钠通过激活AMPK发挥保护内皮功能和抑制血管内皮黏附的效应;