本实验以棉籽饼粕为原料,用盐酸乙醇溶液浸提得到棉酚粗品,通过丙酮和乙醚初步纯化,得到纯度较高的棉酚产品及脱酚的棉籽饼粕。并研究碱法提取棉籽蛋白的最佳工艺参数;将纯化后的棉酚与蛋白质制备成棉籽蛋白结合棉酚,通过动物实验对制备的蛋白结合棉酚进行急性毒性和亚慢性毒性试验及模拟人工胃液的消化研究;结果如下:选用盐酸乙醇溶液进行棉酚的粗提,用80%的丙酮溶液和乙醚进行初步纯化。通过紫外分光光度法测定纯化后的棉酚的含量为61%,对所纯化的棉酚采用紫外扫描分析、红外光谱分析、验证和鉴定,提取物具有棉酚典型的特征吸收峰和结构特征。研究了脱酚棉籽饼粕中棉籽蛋白的提取,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法,得到碱提棉籽蛋白的最优工艺条件:提取温度61℃,液料比20:1,提取时间90min,pH值10.7。提取出的棉籽蛋白蛋白含量达到91%,色泽接近乳白色,棉籽蛋白中的游离棉酚和结合棉酚含量分别为0.0023%、0.00275%,极大地提高了棉籽蛋白的安全性和利用价值。采用纯化后的棉酚和蛋白质进行合成,制备蛋白结合棉酚。用2mg/mL的游离棉酚乙醇溶液和200mg/mL的蛋白质悬浮液,以1:1的体积进行混合,在pH值7.5、温度40℃下进行合成。蛋白结合棉酚制备过程中有少量的游离棉酚反应未完全,需要进行脱除。通过单因素确定蛋白结合棉酚制备的最佳条件为:超声功率80W、液料比25mL/g、时间50min、温度50℃。通过间苯三酚法测定结果为:游离棉酚含量为0.0014%,总棉酚含量为0.76%,游离棉酚的含量远远低于国家标准0.02%。蛋白结合棉酚的急性和亚慢性毒性试验,为棉籽蛋白合理利用提供科学依据。本实验以小鼠作为研究对象,采用灌胃法进行急性毒性和亚慢性毒性试验。试验结果表明,蛋白结合棉酚对小鼠的经口毒性LD50>10g/(kg·d),说明蛋白结合棉酚的急性毒性很小。以1mg/10g、5mg/10g、10mg/10g三个灌胃剂量连续灌胃30d,各实验组小鼠的采食量和体重呈增加趋势;剖检后各脏器未观察到异常现象,中高剂量对雄性小鼠的睾丸和附睾脏器系的影响比较大,差异比较显著;高剂量组对雄性小鼠的肝脏ALT和睾丸LDH的影响比较显著,表现出毒副作用,说明蛋白结合棉酚极有可能在小白鼠体内消化过程中分解为游离棉酚,继续对动物体产生毒副作用。探讨蛋白结合棉酚在动物体内消化降解。小鼠以10mg/10g剂量灌胃30d后,取小鼠血样,采用HPLC法检测血药浓度,血样中未检出棉酚。继而,利用模拟人工胃液A、B对蛋白结合棉酚的消化进行研究,测定不同时间点的棉酚含量。结果表明,当胃液的pH为1.5时,消化时间240min蛋白结合棉酚的转化率达到68.5%,胃液的pH值越接近中性消化力逐渐降低;当pH为1.5时胃液A的消化力强于胃液B,pH大于3.5时,胃液A的消化力低于胃液B。这可能是因为胃蛋白酶在pH为1～2时酶活性最强。人工胃液消化结合棉酚,消化时间在240min之后游离棉酚含量降低,说明游离出来的棉酚可能又与消化降解的氨基酸或蛋白质结合。