慢性乙型肝炎患者HLA-G+MDSCs亚群分析及临床意义探讨

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaomi1028
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目的:  病毒持续性感染与机体的免疫功能低下有关。人类白细胞抗原-G(humanleukocyte antigen G,HLA-G)和髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cell,MDSCs)在诱导机体免疫耐受中具有重要作用。本研究通过建立六色流式细胞术,检测慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者和正常人群外周血MDSCs(Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+)、HLA-G+ MDSCs及其亚群的表达水平,分析各细胞亚群与CHB患者临床病理因素的相关性,探讨CHB患者外周血中HLA-G+MDSCs百分比及其临床意义。  方法:  1.标本选择  连续收集2015年6月12日至2015年10月10日在温州医科大学附属浙江省台州医院就诊的50例CHB患者及37例体检中心正常人群外周血标本,以正常人群外周血标本为对照组。CHB诊断标准参照2000年西安中华医学会传染病与寄生虫病学会和肝病学分会学术会议制定的标准[1]。既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月,现HBsAg和(或)HBV DNA仍为阳性者,可诊断为慢性HBV感染。根据HBV感染者的血清学、病毒学、生物化学试验及其他临床和辅助检查结果,可将慢性乙型肝炎分为HBeAg阳性慢性乙型肝炎:血清HBsAg、HBeAg阳性、抗HBe阴性,HBV DNA阳性,ALT持续或反复升高,或肝组织学检查有肝炎病变;HBeAg阴性慢性乙型肝炎:血清HBsAg阳性,HBeAg持续阴性,抗HBe阳性或阴性,HBV DNA阳性,ALT持续或反复异常,或肝组织学检查有肝炎病变。  2.病毒学评估  2.1乙肝病毒标志物HBsAg,HBeAg,anti-HBs,anti-HBc,anti-HBe,以及HCV,HDV,HIV-1和HIV-2使用荧光酶联免疫分析试剂盒完成。  2.2商业化实时定量PCR诊断试剂盒检测外周血HBV DNA拷贝数。  2.3全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBil含量。  3.外周血MDSCs,HLA-G+MDSCs及其亚群表达百分比检测采用流式细胞术检测MDSCs,HLA-G+ MDSCs及其亚群在外周血中的表达百分比,所有流式数据用FlowJo7.6.1进行分析。  4.统计分析  应用SPSS17.0(SPSS,Inc.,Chicago,IL)对数据进行统计分析。连续型数值变量采用独立样本Kolmogorov-Smirnov正态性检验。不同组间MDSCs,HLA-G+ MDSCs及其亚群百分比比较采用Mann-Whitney U检验。MDSCs亚群与临床参数间的相关性采用Spearman检验。双尾检验p<0.05有统计学意义。  结果:  1.CHB患者和正常对照人群外周血总MDSCs、单核CD14+MDSCs(M-MDSCs)和粒系CD15+ MDSCs(G-MDSCs)表达百分比无显著性差异(p>0.05)。  2.CHB患者HLA-G+ MDSCs表达百分比显著高于对照组(3.30% vs0.40%;p<0.001)。此外,CHB患者HLA-G+ M-MDSCs(0.99% vs0.00%;p<0.001)和HLA-G+ G-MDSCs(0.78% vs0.00%;p<0.001)表达百分比也显著高于对照组。  3.CHB患者HLA-G+ G-MDSCs表达百分比与HBV病毒DNA载量呈负相关(r=-0.310;p=0.032),且HBeAb阳性患者HLA-G+ G-MDSCs表达百分比显著高于HBeAb阴性患者(1.13% vs0.33%;p=0.048)。  4.CHB患者HLA-G+ MDSCs表达百分比与ALP水平呈负相关,G-MDSCs表达百分比与GGT含量呈正相关(r=0.372;p=0.008)。  结论:  本研究首次发现慢性乙肝患者外周血中HLA-G+ MDSCs新亚群。该亚群及HLA-G+M-MDSCs、HLA-G+ G-MDSCs在CHB患者中均显著升高。其中,HLA-G+ G-MDSCs与乙肝病毒DNA载量呈负相关,且在HBeAb阳性患者体内增高最明显。HLA-G+ MDSCs亚群在慢性乙肝患者外周血中显著增多,介导机体的免疫抑制状态,是导致慢性HBV患者迁延不愈的原因之一。
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