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目的:(1)通过体外细胞实验,探讨血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的作用机制,明确Ang Ⅱ对肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HMC)的增殖及荔枝核皂苷(Saponin of Litchi Seed,SLD)的干预作用和机制。(2)明确炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)在DN发生发展中的重要作用。(3)研究细胞因子信号抑制因子-1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)在DN中的地位和作用,明确SOCS-1的表达可以减轻DN的炎症反应。方法:(1)将HMC细胞分为5组:(1)正常组:正常培养细胞(2)Ang Ⅱ 10-6mol/ml组(3)Ang Ⅱ 10-7mol/ml组(4)Ang Ⅱ 10-8 mol/ml组(5)空白调零组:无细胞。(2)首先以MTT比色法进行Ang Ⅱ有效作用浓度的筛选,随后采用不同浓度SLD(5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml)干预,作用时间为48h后收集各组细胞上清液和细胞。(3)应用MTT比色法检测HMC细胞增殖;酶联免疫实验(Elisa法)检测细胞上清液中IL-1β、IL-6的含量;运用蛋白免疫试验(western blot法)检测SOCS-1信号蛋白的表达。结果:(1)MTT法检测结果显示,Ang Ⅱ作用于HMC细胞后,吸光度值(OD值)明显增加(P<0.05),10-6 mol/ml Ang Ⅱ在48h作用最明显(P<0.01)。(2)MTT法检测结果显示,与Ang Ⅱ组相比,SLD高、中、低剂量组均显著抑制HMC细胞的增殖(P<0.01),其中以SLD高剂量组48h抑制率最高(55.43%);(3)ELISA法检测结果显示,与Ang Ⅱ组比较,SLD各剂量组能够抑制HMC细胞的IL-1β、IL-6水平(P<0.01或P<0.05)(4)Western Blot结果显示,Ang Ⅱ组示SOCS-1的蛋白表达量升高,明显高于正常组,差异显著(P*<0.01)。Ang Ⅱ+SLD组与Ang Ⅱ组比较,蛋白表达量显著下降(P*<0.01),但与正常组比较仍然较高。结论:(1)Ang Ⅱ诱导HMC细胞增殖的最佳作用浓度为10-6 mol/ml,吸光度值在48小时作用最明显。(2)随着SLD浓度、时间的增长,抑制率也逐渐增加。说明SLD对HMC细胞增殖的抑制率与浓度、时间密切相关。(3)SLD可使HMC细胞分泌的细胞因子IL-6、IL-1β的含量显著下降,且能抑制HMC细胞的增殖,可减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌,从而延缓肾小球硬化的进程。(4)Ang Ⅱ可以通过SOCS-1信号通路刺激HMC细胞炎症因子的表达,SLD可以抑制HMC细胞蛋白的表达,为研究糖尿病肾病提供新的思路。