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目的:糖尿病是一种代谢紊乱疾病,可以导致糖尿病特有的微血管并发症(视网膜病变、肾病、神经病变)和大血管并发症(心血管疾病和中风),最终导致寿命缩短。糖尿病视网膜病(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见和严重的微血管并发症之一,是成人后天性致盲的主要原因,在失明的患者中85%是由DR引起。DR的特点是新生血管形成,发病机制一般认为是由于视网膜微血管系统受损所致,是多种因素相互作用导致,主要包括周细胞丢失、视神经网膜异常和新生血管形成。而视网膜毛细血管内皮细胞增生是新生血管形成的前提。白藜芦醇(Resveratrol,Res)是从红酒内提取的多酚类物质,它对眼部的主要作用包括:抗氧化应激、抗细胞凋亡、抗肿瘤基因、抗炎、抗血管生成以及血管舒张。基于新血管生成是糖尿病眼病发生发展的病理机制之一,本研究观察了Res对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖和细胞周期的干预作用,并对其分子机制进行了探讨,为Res在糖尿病眼病治疗方面提供了新的实验依据。方法:1细胞增殖活性的检测将处于对数生长期的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)接种于96孔板中,分为:高渗组(M)(25 mmol/L甘露醇),正常糖浓度组(N)(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(H)(25 mmol/L葡萄糖),高糖+白藜芦醇组(R)(R1、R2、R3、R4组分别为25mmol/L葡萄糖加入25、50、100、200μmol/L Res),作用24 h后用CCK-8法检测细胞增殖活性。细胞计数检测药物作用24h后的HRCECs细胞增殖活性,处理条件同上。2细胞周期的检测分为高渗组(M)(加入25 mmol/L甘露醇),正常糖浓度组(N)(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(H)(25 mmol/L葡萄糖),高糖+白藜芦醇组(R)(R2、R3组分别为25mmol/L葡萄糖加如50、100μmol/L Res),培养24h后,用流式细胞仪检测细胞周期分布情况。3分组情况同方法2,Western blot及real-time PCR法检测细胞周期相关蛋白及其上游m RNA的表达情况。结果:1细胞增殖活性的检测:与正常糖浓度组(N)相比,高渗组(M)细胞增殖活性无显著性差异,而高糖组(H)细胞增殖活性则明显增高(P<0.05);不同浓度的Res处理24h后,R1、R2、R3、R4组细胞增殖活性较高糖组分别下降了4%、11%、16、47%,其中R2、R3、R4组与高糖组比较有显著性差异(P<0.05)(Fig.2A);细胞计数分析结果显示,与正常糖浓度组(N)相比,高渗组(M)无显著性差异,而高糖组(H)细胞计数则明显增高(P<0.05);用不同浓度的Res作用HRCECs细胞24 h后,细胞数目明显减少,与H组相比,R1、R2、R3、R4组细胞数量分别减少了17%、41%、58%、75%(P均<0.05)(Fig.2B,Fig.3)。2流式细胞学结果:高糖组(H)S期的细胞数目明显减少(P<0.05)。高糖环境下不同浓度Res(50、100μmol/L)处理24h后,可使处于S期的细胞数显著增加(P<0.05),抑制高糖环境下HRCECs细胞周期进程(Fig.4,Table 1)。3 Western blot及Real-time PCR结果示:与正常糖浓度组(N)比较,高渗组(M)细胞的cyclin A1、CDK2、PCNA m RNA及蛋白的表达无显著性差异,而高糖组(H)cyclin A1、CDK2、PCNA的表达增加,P21CIP1表达下降,P均<0.05;Res(50、100μmol/L)处理24h可剂量依赖性地抑制高糖下HRCRCs细胞的cyclin A1、CDK2、PCNA的表达,增加P21CIP1的表达量(P均<0.05)(Fig.5-Fig.8,Table 2,Table 3)。结论:1高糖培养可能通过对细胞进程的影响及上调cyclin A1、CDK2、PCNA的表达,抑制P21CIP1表达,从而增加HRCECs细胞的增殖活性;2 Res剂量依赖性地抑制高糖环境下HRCECs细胞的增殖活性与对细胞周期的调控,抑制cyclin A1、CDK2、PCNA表达及上调P21CIP1表达有关。