高雄激素症状(hyperandrogenism)或高雄激素血症(hyperandrogenemia)是多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome，PCOS)的重要病理生理改变，异常升高的黄体生成素(luteinizinghormone，LH)及高胰岛素血症(hyperinsulinemia)最终都可引起卵巢卵泡膜细胞雄激素合成增加。为探讨特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)对雄激素合成的影响，针对雄激素合成关键酶17α-羟化酶和17,20-裂解酶，由CYP17基因编码，化学合成4条CYP17siRNA。由于卵泡膜细胞标本的珍贵和稀少，构建携带CYP17和报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein，EGFP)的质粒转染人宫颈癌细胞HeLa，观察不同CYP17siRNA对外源性CYP17基因的抑制效果。同时观察筛选出最佳的CYP17siRNA对PCOS和正常人卵泡膜细胞合成雄激素的影响，从而研究RNA干扰技术在降低PCOS高雄激素合成中的应用可能性。 第一部分CYP17siRNA的有效性筛选目的:应用RNA干扰技术探讨不同CYP17siRNA对外源性CYP17基因的抑制效果及与剂量的相关性。 方法:构建携带目的基因CYP17及报告基因增强型绿色荧光蛋白的质粒，使用脂质体将质粒转染入HeLa细胞，同时共转染候选的4条siRNA(siRNA481，siRNA1074，siRNA1221，siRNA827)和一条阴性对照(nonspecificsiRNA)，荧光显微镜观察及流式细胞术(flowcytomety,FCM)检测绿色荧光蛋白的表达反映对CYP17表达的影响，筛选出一条抑制效果最佳的siRNA。在后续的实验中，以该siRNA为实验对象，和nonspecificsiRNA各自以10nM、20nM、50nM、100nM、200nM的浓度与质粒、脂质体共转染，探讨其抑制效果与剂量的相关性。 结果:1.将质粒、4条CYP17siRNA或nonspecificsiRNA与脂质体共转染HeLa细胞72h后，与仅转染质粒组、nonspecificsiRNA组相比较，siRNA1221组绿色荧光蛋白表达水平明显下调。 2.各自以10nM、20nM、50nM、100nM、200nM的浓度与质粒、脂质体共转染，以仅转染质粒组的绿色荧光蛋白强度为1，各组相对绿色荧光强度分别为：nonspecificsiRNA组：1.0718±0.11435，0.9565±0.11443，0.9690±0.10193，0.8847±0.31303，1.2359±0.18436；siRNA1221组：1.0716±0.23704，0.8669±0.25057，0.3797±0.05921，0.5141±0.11899，0.7630±0.18257，呈剂量相关性。 结论:1.靶向CYP17的序列特异性siRNA可有效地抑制外源性CYP17基因的表达。 2.针对同一基因，采用同一浓度，设计的不同siRNA的抑制效果不同。 3.同一条siRNA，在一定浓度范围内，抑制效果具有剂量相关性。 第二部分CYP17siRNA对人卵泡膜细胞雄激素合成的影响目的:应用RNA干扰技术探讨CYP17siRNA对体外培养的人卵泡膜细胞CYP17基因表达的抑制效果及对雄激素合成的影响。 方法:将筛选出的最佳的CYP17siRNA(siRNA1221)与脂质体转染人卵泡膜细胞，荧光定量实时逆转录多聚酶链反应(real-timereversetranscription-polymerasechainreaction,real-timeRT-PCR)检测CYP17mRNA的表达，竞争ELISA法检测培养液中的CYP17作用产物雄烯二酮(androstenedione，A)水平，ACS180·SE自动化学发光检测仪检测CYP17作用前体孕酮(progesterone，P)水平。 结果:1.将siRNA1221与脂质体转染人卵泡膜细胞72h后，与nonspecificsiRNA组相比较，CYP17mRNA水平下调，但差异无统计学意义。 2.将siRNA1221与脂质体转染人卵泡膜细胞72h后，合成的雄烯二酮降低，但与nonspecificsiRNA组相比较，差异无统计学意义。孕酮水平在两组均有下降。 结论:1.靶向CYP17的序列特异性siRNA可抑制人卵泡膜细胞CYP17基因的表达，从拷贝数计算得到mRNA水平抑制率为38.10％。 2.靶向CYP17的序列特异性siRNA可降低雄烯二酮的合成，但与nonspecificsiRNA组相比，差异无统计学意义。