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多氯联苯(Polychlorinated biphenyls,PCBs)是联合国环境保护署要求逐步消除的持久性有机污染物之一,据世界卫生组织(WHO)统计,在全世界生产的工业PCBs约有2×107吨,其中排放到环境中的约占31%。PCBs作为一种环境污染物在世界范围内广泛分布,含量从ppt到几百个ppm不等。目前分析PCBs在环境中的含量最常用的方法是色谱法,这种方法需要复杂的样品前处理过程、精密的分离检测仪器、良好的实验环境和训练有素的操作人员,所以限制了其应用。与色谱法相比,酶联免疫吸附分析法(ELISA)样品前处理简单、灵敏度高、特异性强、成本低,并能应用于现场检测。因此,开展PCBs的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的研究,具有重要的现实意义。多氯联苯是联苯上的氢原子在不同程度上被氯原子取代后生成的人工有机化合物的总称,共有209种同系物。本研究选取共面PCB77为多氯联苯的代表物,对PCB77的酶联免疫吸附分析方法进行研究,选择具有活性基团和PCB77特异性结构的3,4-二氯苯基乙酸作为半抗原,在低温和弱碱性条件下,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23:1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体。经琼脂双扩散和间接ELISA检测表明,其琼脂双扩散的结果在1:16以上,ELISA测得效价在1:20000以上,符合ELISA分析技术建立对抗血清效价的要求,用辛酸-硫酸铵盐法对抗血清进行纯化。采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,其结合比为8:1,用作ELISA检测包被原。本研究从固相包被条件的选择、最佳工作浓度的确定和基质条件的优化等方面初步得到间接ELISA分析方法的工作条件,并在优化条件下建立PCB77检测的间接ELISA方法,在绘制标准曲线中,抑制率与PCB77的浓度对数值呈显著的线性关系,其回归方程为Y= -0.1370Ln(x)+ 1.1043,可决系数R2=0.9930,其检测范围在0.75~300ng/L之间,最低检测限IC10=4.44ng/mL,初步鉴定抗体满足实验检测需要。采用间接ELISA法对PCB77的结构类似物进行交叉反应试验,当PCB77对抗原抗体反应的抑制率为50%时,所需PCB77的浓度为82.16 ng/mL,PCB126的浓度为270.43 ng/mL,交叉率为30.4%,DCP的浓度为897.84 ng/mL,交叉率为9.1%,2,4-D的浓度为2221.64 ng/mL,交叉率为3.7%,三氯乙酸的浓度>8000 ng/mL,交叉率<0.1%。以建立的ELISA检测方法对添加在土壤和水样中的样品进行回收,测定PCB77在土壤中的添加回收率为109~146%,三个平行的变异系数在5.00~11.77之间,在水样中的添加回收率为84%~98%,三个平行样的变异系数在2.84~7.75之间。综合分析,本研究成功制备了PCB77的人工抗原,经动物免疫获得了高效价的抗血清,可用于建立PCB77的间接ELISA方法。经优化,建立了PCB77的标准曲线,与结构类似物的交叉反应不明显,可以用于含有PCB77的环境样品的初筛选,为研究和开发PCB77的ELISA试剂盒奠定了基础。