肠道菌-红城红球菌脂滴蛋白组与运动的关系研究

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目的:本研究以肠道放线菌—红城红球菌(Rhodococcus erythropolis,R.erythropolis)为研究对象,通过对该细菌的培养,确定其含有脂滴,并对脂滴进行纯化,同时对该细菌的脂滴蛋白组进行分析从而确定该细菌脂滴的主要蛋白,进而利用此脂滴主要蛋白类比寻找更多可能含有脂滴的肠道菌,并分析可能含有脂滴的肠道菌在不同运动强度下的女游泳运动员体内丰度变化的相关性,从而为改善运动员的机体健康和运动表现提供一种新的研究思路和方向。方法:在本实验中,检测并绘制肠道菌R.erythropolis生长曲线。首先通过酶学分析和显色方法,检测甘油三酯(TAG)和蛋白的相对含量,然后用薄层层析分析中性脂成分,进而用激光共聚焦显微镜观察菌体内中性脂染色情况及脂滴样结构。这三种方法用于鉴定肠道菌R.erythropolis中是否含有脂滴。同时利用生物物理和生物化学方法纯化肠道菌R.erythropolis的脂滴,并分析纯化的脂滴脂质组学和蛋白组学,确认其脂滴主要蛋白,证实肠道菌R.erythropolis含有脂滴。并对其主要蛋白进行绿色荧光蛋白脂滴定位分析。运用生物信息学的方法和原理,类比寻找可能含有脂滴的细菌,同时对不同运动强度下女游泳运动员肠道微生物数据库16S rRNA高通量测序原始数据进行分析。结果:1)肠道菌R.erythropolis生长在36小时达到饱和。2)肠道菌R.erythropolis的TAG在36小时时积累最多。3)肠道菌R.erythropolis菌体和脂滴的中性脂质成分最多的是TAG,脂滴的脂质组成成分还有其他中性脂质和磷脂。4)对两次重复脂滴蛋白样品进行溶液酶解,得到两次样品的蛋白组学分析结果,共发现224个脂滴蛋白,按照功能共分为8组。5)确定PspA定位到脂滴上。6)33种菌属均可能含有脂滴。7)可能含有脂滴的肠道菌在高强度运动中的相对丰度比低强度运动中高。结论:1)肠道菌R.erythropolis菌体内有脂滴。2)蛋白PspA是肠道菌R.erythropolis脂滴的主要蛋白。3)33种菌属均可能含有脂滴。4)可能含有脂滴的肠道菌在高强度运动中的相对丰度比低强度运动中高。
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