目的及意义：以纯化的人转铁蛋白受体（TfR）蛋白为免疫原，建立能分泌抗人TfR单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株，并制备纯化单抗。期望所研制的抗体为人肝癌中TfR的表达、生物学功能研究以及为以TfR为靶点的肿瘤的靶向治疗研究奠定基础。　　内容、方法及结果：　　1.HepG2细胞中TfR表达的鉴定：通过RT-PCR、Western Blot方法均证实了TfR在HepG2细胞中高表达，用免疫荧光方法对HepG2细胞中TfR进行定位分析，表明TfR在细胞膜表面及细胞质内均有表达。　　2.TfR的提取与纯化：提取HepG2细胞总蛋白，用亲和层析柱分离纯化TfR蛋白，再用50kd Millipore超滤管将蛋白浓缩脱盐。通过SDS-PAGE电泳检测证实纯化样品确为TfR蛋白。　　3.TfR免疫BALB/C小鼠及细胞株的建立：用纯化的TfR抗原对Balb/C小鼠进行3次免疫后，通过间接ELISA方法检测免疫小鼠抗体效价，选取效价最高的小鼠进行加强免疫。采用聚乙二醇法将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0的细胞融合，通过HAT选择培养基和间接ELISA法初筛出20个阳性杂交瘤细胞孔，采用Cell-ELISA法进一步筛选培养上清，其中B6、E8两个孔培养上清与HepG2细胞结合阳性，其中B6培养上清阳性反应最强，将其扩大培养并用有限稀释克隆法进行克隆化处理，通过Cell-ELISA法检测克隆细胞上清，细胞克隆阳性率为100％。将此细胞扩大培养并冻存。　　4.小鼠腹水抗体的制备：将分泌TfR特异性抗体的杂交瘤细胞，注射入石蜡油致敏的Balb/C小鼠腹腔，收集腹水，用间接ELISA法检测腹水抗体效价可达1:20000。　　5.杂交瘤细胞染色分析：采用秋水仙素法，得到杂交瘤细胞的染色体为58±2对，由于杂交瘤细胞不稳定，一部分染色体会丢失，实验结果接近两种亲本细胞染色体数目的总和，证明细胞融合成功。　　6.单克隆抗体免疫学性质鉴定：　　①免疫荧光染色法鉴定：免疫荧光结果显示TfR单抗能与HepG2细胞膜表面TfR结合，在细胞表面呈现绿色荧光。　　②Western Blot法鉴定：用HRP-羊抗小鼠IgG标记，经底物显色后在95kDa左右可见清晰的目的条带。　　结论：　　1.利用亲和层析技术，在TfR高表达的肿瘤细胞中成功提取出TfR蛋白。　　2.采用小鼠杂交瘤技术，制备出能特异性分泌TfR抗体并能与HepG2细胞表面TfR结合的单克隆抗体，抗体表现出良好地结合TfR活性。