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目的:(1)研究兔角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养的生物学特性,为组织工程角膜奠定基础。(2)研究寻找适合的异种脱细胞角膜基质,进行生物材料的制孔处理,研究角膜3种细胞在这些材料上的生长情况。(3)初步探讨高性能生物型角膜基质的移植效果。 方法:(1)采用组织块法、消化法分离培养兔角膜上皮、基质及内皮细胞。同时对生长良好的原代细胞进行消化传代,进一步观察传代细胞的形态和生长情况。(2)采用多种方法脱角膜细胞基质,寻找适合的角膜脱细胞基质方法,并与正常角膜进行生物特性的比较。(3)采用快速冷冻干燥法和化学方法对生物材料进行制孔处理。(4)将兔角膜上皮、基质及内皮细胞种植于生物材料上进行体外培养,观察培养细胞的生长、排列和细胞的粘附情况。检测基质细胞在生物材料上的增殖情况。(5)将高性能生物型角膜基质在兔角膜上进行前板层移植,观察移植后效果。 结果:(1)兔角膜上皮、基质及内皮细胞均可在培养瓶和培养板内贴壁生长,能培养形成单层,细胞形态典型,进行多次传代细胞仍维持原有的形态特征。(2)用胰酶消化-冷冻法处理的兔角膜脱细胞基质未见细胞成分,细胞外基质的结构未见明显的破坏,脱细胞基质在生物力学特性上与新鲜角膜未有显著性差异。(3)兔角膜三种细胞在脱细胞角膜基质和材料上生长良好,可保持生理状态的细胞形态,细胞与材料粘附牢固。角膜上皮细胞可形成单层,细胞间连接紧密。角膜基质细胞梭形生长,呈树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接。角膜内皮细胞可呈卵圆形,细胞大小一致,排列紧密。通过CCK8增殖检测发现,培养10d后基质细胞在脱细胞角膜基质较合成生物材料上随着时间增殖数值更高。(4)快速冷冻干燥法和化学方法是较好的制孔方法。(5)在兔角膜上进行前板层移植的高性能生物型猪角膜基质术后四个月,较透明,无明显的炎症反应。