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采用动物回归实验分离了4株RHDV毒株，命名为SQ-1、SQ-2、DB-1、BJ-1株，其中SQ-1株不能凝集人“O”型红细胞。克隆病毒VP60蛋白基因，核苷酸序列进化树分析显示，4毒株同属RHDVa变异群，其中SQ-2株位于RHDVa群进化树分支最底端，氨基酸序列进化树分析显示，SQ-2株病毒独立位于RHDVa进化树与原始毒株进化树分支之外，并位于最底端；序列同源性比对分析显示，SQ-1、SQ-2、DB-1、BJ-1株与其它毒株核苷酸序列同源性分别在89.5%-98.0%、91.4%-95.6%、90.2%-98.7%、89.7%-97.6%之间，氨基酸序列同源性分别在94.1%-99.3%、94.8%-96.5%、94.4%-99.5%、94.0%-99.3%之间；通过与血凝性、无血凝性毒株氨基酸序列分析比对发现，SQ-1株VP60蛋白第432、480位氨基酸残基可能对该毒株血凝特性产生一定影响；根据流行年代分析了RHDVa已经发生的变异流行趋势与未来可能的变异方向，304、305、414、425与432氨基酸位点已经演变，近期流行毒株开始出现13、237、299、309、324、346、348与351氨基酸位点变异；RHDVa与原始群毒株存在12个氨基酸残基差异及多个交互变异位点。根据已发表及本研究所克隆VP60蛋白的核苷酸序列，设计合成特异性引物，经反应条件的优化，建立了基于SYBR Green I荧光染料的RHDV Real-timeRT-PCR检测方法。通过敏感性、重复性、标准曲线建立等表明，该方法可检出的最低拷贝数为101，较普通RT-PCR敏感性高一个数量级。实际应用结果显示，Real-time RT-PCR方法检测阳性率为74.8%，而普通RT-PCR方法检测阳性率为65.5%。同时，建立了RT-LAMP检测方法，通过评价特异性、敏感性、检出时间以及临床应用等指标，证实该方法能够特异、敏感的检测RHDV感染，酶切扩增产物证实，该方法能够特异性的扩增；其敏感性高，可检出的拷贝数在102以上，而且临床检出阳性率较普通RT-PCR高；扩增反应可在30min内完成，缩短了检测耗时；动物攻毒试验证实，以上两种方法的检出阳性率均为100%。利用原核表达技术获得了RHDV重组截短的VP60蛋白，并以重组VP60蛋白为诊断抗原，建立了检测RHDV抗体的ELISA诊断方法，检测RHDV阳性血清的最低抗体效价高稀释比例为1:6400，并具有良好的特异性，批内、批间重复变异系数分别小于4.9%、6.9%，与血凝抑制试验（HI）的符合率为94.4%；检测河南、山东、河北等地采集的1710份兔血清样品，检测阳性率为81.5%。同样，利用原核表达体系表达VP60完整蛋白，纯化可溶性部分，利用胶体金标记技术，根据免疫层析原理，以胶体金标记的SPA（金黄色葡萄球菌蛋白A）作为探针，以纯化得到的VP60重组蛋白和纯化的兔IgG分别作为检测线和质控线的捕获试剂，研制并建立了RHDV抗体免疫胶体金快速检测方法。该方法特异性强，敏感性高，较血凝抑制方法高4倍；批间、批内重复均无差异性，临床应用显示，胶体金试纸条检测抗体阳性率为90.0%，而血凝抑制检测抗体阳性率为68.3%，大幅度提高了敏感性。综上，在分析4株RHDV分离毒株遗传变异趋势、进化来源与SQ-1株病毒丢失“O”型红细胞凝集特性诱因的同时，建立了RHDV抗原Real-time RT-PCR与RT-LAMP、抗体间接ELISA与免疫胶体金快速检测方法，通过与相应经典检测方法比对与临床应用，证明所建立的检测方法能够用于临床检测，具有良好的应用前景，为该病的防控提供了理论依据与技术保障。