过多的活性氧能够引起机体内氧化系统和抗氧化系统的失衡,引起细胞氧化损伤。而氧化损伤会触发细胞的自由基链式反应,产生脂质过氧化反应,损伤细胞膜结构;会使蛋白质或酶过度氧化,蛋白质功能丧失,酶失去活性;与DNA、RNA发生交联,造成基因表达异常,进而引起一系列与氧化损伤有关的慢性疾病,如衰老、炎症、神经退行型疾病等。松花粉提取物、葡萄籽提取物以及竹叶黄酮,三种植物提取物具有天然、无毒副作用的特点。其中,松花粉,是植物的生命精华,被称为“最佳健康品”。松花粉中含有丰富的营养物质,具有抗氧化、免疫、抗炎等作用。葡萄籽提取物中富含原花青素,在对抗氧化应激、抗炎、抗菌、预防心血管疾病、神经保护作用等方面有良好效果。竹叶黄酮,其功能因子为水溶性的黄酮糖苷,具有抗自由基、抗脂质过氧化、抗辐射、抗菌等作用,亦可作为食品添加剂用于油脂等食品中。因此,作为良好的天然活性物质,植物提取物在防御氧化损伤方面的功能受到越来越多的关注。本论文中,我们研究松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮三种植物提取物对H₂O₂氧化损伤PC12细胞的可能的保护作用。主要研究内容如下:1.利用MTT法,建立H₂O₂氧化损伤模型。选用100、150、200、300、400、500μM H₂O₂作用PC12细胞4 h后,与对照组相比,细胞存活率分别降为87.56%、55.38%、26.38%、9.26%、4.05%、3.37%。因此,选用150μM H₂O₂、作用时间4 h为氧化损伤模型。2.采用MTT法,选择松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮三种植物提取物作用浓度梯度。PC12细胞经三种植物提取物作用24 h,用150μM H₂O₂处理4 h后,测定细胞存活率。根据细胞存活率,确定松花粉提取物的作用浓度为25、50、100μg/mL;葡萄籽提取物的作用浓度为5、25、50μg/mL;竹叶黄酮的作用浓度为50、100、200μg/mL。3.采用MTT法,测定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮三种植物提取物在浓度范围内的毒性,同时,测定三种提取物对氧化损伤PC12细胞的保护作用。结果表明,三种提取物能够提高氧化损伤PC12细胞的存活率,且在所选浓度范围内,三种植物提取物均对PC12细胞无毒性。4.检测乳酸脱氢酶胞外释放量、胞内丙二醛、活性氧的含量,分别研究松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮对H₂O₂氧化损伤PC12细胞的细胞膜受损情况、脂质过氧化情况以及细胞氧化水平的影响。结果表明,在作用浓度范围内,三种植物提取物均能够降低氧化损伤细胞胞外乳酸脱氢酶的释放量;降低细胞的氧化水平以及脂质过氧化产物丙二醛的含量。5.测定超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力以及谷胱甘肽含量,研究松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮对H₂O₂氧化损伤PC12细胞内抗氧化酶和抗氧化物的影响。结果表明,三种提取物能够提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力以及提高细胞内谷胱甘肽的含量。这说明,三种植物提取物可通过提高机体抗氧化酶活力和抗氧化物含量来发挥抗氧化作用。6.采用JC-1荧光探针法,测定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮对H₂O₂氧化损伤PC12细胞的线粒体膜电位的影响。结果表明,三种植物提取物均能提高氧化损伤PC12细胞的线粒体膜电位,保护氧化损伤细胞线粒体膜的稳定性。7.采用PI单染法和RT-PCR法,测定松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮对H₂O₂氧化损伤PC12细胞的细胞周期及相关周期蛋白的影响,对三种植物提取物保护机理进行初步探究。结果表明,PC12细胞经H₂O₂氧化损伤处理后,细胞阻滞在S期;而经三种提取物处理后,改善细胞阻滞的现象。本文的研究结果表明,PC12细胞经150μM H₂O₂氧化损伤处理4h后,细胞产生氧化损伤。而经松花粉提取物、葡萄籽提取物、竹叶黄酮预处理,可改善细胞的氧化损伤,对细胞有良好的保护作用。因此,这些结果进一步为与氧化损伤相关疾病的防治提供了可能和依据。