论文部分内容阅读
研究背景：食管癌是常见的恶性肿瘤之一，食管癌的病理类型主要为鳞癌，少数为腺癌。对于局部晚期的患者，手术难度较大，难以切除病灶，主要采取放疗，配合化疗可提高局部控制率和降低远地转移风险。进一步优化三维适型及调强适型的放疗技术、寻找放疗的预后和预测因子、制定个体化治疗方案仍然是目前食管癌放疗的重要研究方向，联合靶向药物或新的化疗药物以期进一步提高放疗敏感性和空间协同作用正愈来愈受到重视。食管癌放疗联合靶向药物正处在一个起步阶段，研究还相对较少。本课题初步探讨重组血管内皮抑素对食管癌KYSE-150细胞的辐射增敏机制,为重组血管内皮抑素联合放疗的临床研究提供基础理论支持。研究目的：本课题研究血管生成抑制剂重组血管内皮抑素（RecombinantHumanEndostatin，rhES）联合X线照射对食管癌细胞KYSE-150增殖能力的影响；探讨rhES对KYSE-150细胞辐射敏感性的影响；通过对rhES联合X线照射后KYSE-150细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、乏氧诱导因子-1(hypoxiainduciblefactor-1，HIF-1)蛋白表达水平的检测，对rhES增敏机制进行初步探讨。研究方法：1.利用MethylThiazolylTetrazolium(MTT)法检测rhES对食管癌细胞KYSE-150和成纤维细胞L929（对照细胞）存活分数的影响。2.克隆形成法检测食管癌细胞KYSE-150和成纤维细胞L929的辐射敏感性、rhES对细胞辐射敏感性的影响。3.应用蛋白质印迹(WesternBlot,WB)法研究rhES对X线照射后KYSE-150细胞和成纤维细胞L929的VEGF、HIF-1蛋白表达水平的影响。研究结果：1. RhES对食管癌细胞KYSE-150的增殖抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性，其抑制作用随浓度升高和时间延长而增加。rhES对L929细胞增殖抑制作用不具有显著统计学差异。2.相同照射剂量下，KYSE-150细胞克隆形成率随rhES浓度增加而减小，相同rhES浓度下，KYSE-150细胞克隆形成率随照射剂量增加而减小，rhES浓度与辐射剂量对食管癌细胞的辐射增敏效应存在交互作用；存活率为0.5时，KYSE-150细胞的辐射增强系数均随rhES浓度增加而升高。随rhES浓度的增加，KYSE-150细胞的D0、Dq、SF2值均逐渐减小，且具有浓度依赖性；在D0照射剂量时，200μg/mLrhES的放射增敏比达1.28;L929细胞细胞的D0、Dq、SF2值及放射增敏比无明确下降趋势,且无统计学意义。3. X线照射KYSE-150细胞后VEGF表达水平稍增加，HIF-1表达水平降低；RhES处理后KYSE-150细胞VEGF、HIF-1蛋白表达水平均降低；RhES联合X线照射相比于单独照射KYSE-150细胞VEGF、HIF-1蛋白表达水平明显降低。X线照射和rhES单独、联合作用L929细胞时，L929细胞均未见VEGF、HIF-1蛋白表达。研究结论：1. RhES明显抑制食管鳞癌系KYSE-150细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性。2. RhES能提高食管鳞癌系KYSE-150细胞对X射线的辐射敏性,200ug/mlrhES对KYSE-150细胞有较好的辐射增敏作用。3. RhES降低KYSE-150细胞VEGF、HIF-1蛋白表达水平；提示rhES可通过下调KYSE-150细胞VEGF、HIF-1蛋白表达水平，发挥辐射增敏作用。