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研究背景和目的:防御素是抗微生物肽的一个主要家族成员,是由白细胞和上皮细胞产生的内源性的,富含半胱氨酸的小分子抗微生物肽。近年来积累了大量的证据表明,哺乳动物防御素是多功能的,并且通过与宿主细胞受体相互作用,参与宿主的固有和适应性抗微生物免疫反应。人中性粒细胞肽-1(HNP-1)是人中性粒细胞中的主要α-防御素。尽管最初被定义为一种抗微生物肽,HNP-1随后被发现对免疫系统的白细胞具有许多功能。HNP-1在体外对人的T细胞具有趋化作用,并且招募人的T细胞至体内的感染位点。HNP-1具有诱导体外人单核细胞或体内呼吸道产生肿瘤坏死因子的能力。HNP-1被报道能够诱导人单核细胞来源的DCs表型和功能成熟。由于具有DC-趋化和激活效应,HNP-1被列为警报素家族的一员,内源性介质能够招募和激活DCs,从而激活先天性和适应性免疫反应。然而,它是否能够激活人的p DC细胞还不确定。本研究第一部分观测HNP-1引起人的p DC细胞活化情况,并通过ELISA和real time PCR的方法检测引起的IFN-α表达的量。接下来通过观察IRFs和NF-κB的核移位研究HNP-1活化p DC细胞的分子机制。进一步研究HNP-1在体内发挥的作用。本研究第二部分通过检测类风湿关节炎患者滑膜液中HNP-1以及p DC细胞、中性粒细胞的表达,探讨HNP-1的临床意义,为临床治疗类风湿关节炎提供新的思路和靶点。研究方法:1.应用ELISA方法检测HNP-1诱导的CAL-1细胞和人的p DC细胞培养基上清液中IFN-α的浓度。2.利用定量PCR实验检测HNP-1诱导的CAL-1细胞和人的p DC细胞中IFN-α和IFNβ1的基因表达情况。3.应用Western blot的方法检测CAL-1细胞中IRF-1,NF-κB p50,p65蛋白的表达水平。4.应用小RNA干扰技术转染CAL-1细胞后,IRF-1的蛋白水平明显下降。5.应用流式细胞计数检测中性粒细胞和人的p DC细胞的浓度。结果:1.HNP-1能够诱导p DC细胞活化产生IFN-α和IFNβ1,而且是剂量依赖关系,HNP-1是p DC细胞的激活剂。2.HNP-1促进Gp G ODN诱导的p DC细胞活化产生IFN-α和IFNβ1。3.HNP-1能够诱导CAL-1细胞活化产生IFN-α,HNP-1促进Gp G ODN诱导的CAL-1细胞活化产生IFN-α。4.HNP-1激发CAL-1细胞的NF-κB和IRF-1信号通路。5.BAY-11-7082阻断NF-κB的激活,抑制HNP-1诱导的p DC细胞IFN-α,IFNβ1和IL-6促炎细胞因子的产生。6.降表达IRF-1后抑制HNP-1诱导的p DC细胞IFN-α,IFNβ1和IL-6促炎细胞因子的产生。7.SCID小鼠实验证实HNP-1不仅在体外能够诱导人的p DC细胞的活化,在体内同样可以活化人的p DC细胞,使其产生大量的IFN-α。8.类风湿关节炎患者滑膜液中的中性粒细胞和p DC细胞显著增多,而且含有大量的HNP-1蛋白。结论:1.HNP-1诱导体外p DC细胞活化。2.HNP-1激发NF-κB和IRF-1信号通路。3.NF-κB和IRF-1对HNP-1诱导的p DC细胞活化起重要作用。4.HNP-1诱导SCID小鼠体内p DC细胞的活化。5.中性粒细胞,HNP-1,和p DC共同存在于类风湿关节炎患者滑膜液中。