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目的:探究鹿筋胶原健骨的生物学机制。方法:采用酸酶结合方法建立鹿筋胶原的提取制备工艺;采用CCK-8方法观察鹿筋胶原对成骨细胞的增殖影响;通过转录组测序技术观察鹿筋胶原对成骨细胞的基因表达变化;在细胞和分子水平上揭示鹿筋胶原健骨功效的生物学机制。通过细胞增殖法和转录组测序技术对人参和鹿筋的协同作用进行了相关研究。结果:1.通过单因素分析及正交试验,建立了鹿筋胶原提取制备工艺,具体工艺为应用5%醋酸体积溶液浸泡鹿筋颗粒48h,煎煮1.5h后按照酶底比1:1000加入胃蛋白酶,继续酶解6h,收率可达58.56%,纯度可达48.4%;2.采用CCK-8法,阐明了鹿筋胶原在4mg/ml至10mg/ml浓度范围内对MC-3T3细胞具有促增殖作用,且呈一定的量效关系,在浓度为8mg/ml时促增殖作用最明显。3.通过RNA-seq测序技术和手段,建立了鹿筋胶原的转录组数据库,通过生物信息学分析方法,共鉴定出到852个差异表达基因,与空白组比较,鹿筋胶原处理组显著上调的差异表达基因502个,这些基因主要参与调控成骨的细胞代谢、增殖调节;显著下调的差异表达基因350个,这些基因主要参与调控成骨生物进程。GO功能富集分析结果表明这些差异表达基因主要参与调控细胞调节代谢、信号通路、免疫系统进程、应激反应、生物进程、细胞组织成分的正调节、生殖增殖调节等。KEGG代谢通路富集分析进一步表明这些差异表达基因主要参与PI3K-Akt信号通路,HTLV-I infection信号通路,MicroRNAs in cancer信号通路、Focal adhesion信号通路的调节对MC-3T3细胞进行调控。4、通过CCK-8法和转录组测序技术对人参水提物和鹿筋胶原的协同作用进行了相关研究,结果表明,人参水取物可明显提高鹿筋胶原的作用,两者等比例混合后鹿筋促增殖作用显著增强。构建了鹿筋胶原与人参提取物等比例混合作用后的MC-3T3转录组数据库,GO功能富集分析结果表明鹿筋与人参提取物在细胞调节代谢、免疫应激反应、细胞正调节、生殖增殖等方面的调控作用来实现对MC-3T3细胞的调节作用。KEGG代谢通路富集分析结果表明主要参与的信号通路包括Prolactin信号通路、PPAR信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、mRNA surveillance信号通路、RNA转运、NOD-like receptor信号通路等。鹿筋胶原与人参提取物协同作用后能够调节细胞增殖作用的基因表达的基因包括Tmem254,Vps35,MALAT1,Smc2,KIF5B,Dlk2,Atp5g2,Apoo-ps,使得调节细胞增殖作用的基因表达水平以维持细胞增殖。结论:鹿筋胶原可以促进MC-3T3细胞增殖,显著提高MC-3T3细胞的促增殖活性,同时,鹿筋胶原可以调节参与调控细胞增殖作用的基因表达水平,从而实现健骨的功效。此外,人参水取物可明显提高鹿筋胶原的作用,两者等比例混合后鹿筋促增殖作用显著增强。