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目的:对本实验室初步建立的人白介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯表达体系作进一步研究,了解转基因马铃薯中hIL-12的表达情况及生物学活性。
方法:采用ELISA和Western Blot检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况;通过ELISA观测hIL-12诱使外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的能力,反映其生物学活性;通过MTT法检测hIL-12体外抗肿瘤作用;采用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察经转基因马铃薯中hIL-12刺激肿瘤细胞的凋亡情况。
结果:转基因马铃薯叶与块茎中均有hIL-12的表达,其叶与块茎表达hIL-12的量分别为222.89±43.12~424.24±45.08pg/ml和1428.58±80.13~841.68±133.76pg/ml,与野牛对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。Western Blot分析结果显示,在40kD处有特异性的蛋白条带出现。转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12(rhIL-12)在25~400pg/ml浓度间,在体外均能刺激PBMCW生IFN-γ,并对NK敏感肿瘤细胞K562以及HepG22.2.15细胞均有杀伤作用,而野生对照组无作用。用ArinexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察,经转基因马铃薯中表达的hIL-12作用的肿瘤细胞中,凋亡早期细胞呈Annexin V高染而PI低染,细胞膜呈绿色而细胞核不着色:凋亡中、晚期细胞则Annexin V和PI均为高染,细胞膜呈绿色而细胞核呈红色。
结论:本实验室建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系能表达具有生物学活性的hIL-12。