论文部分内容阅读
本论文旨在研究士的宁对神经元动作电位及钾离子通道动力学的调节作用,揭示其作为中枢兴奋药的可能通道药理学机制。通过全细胞膜片钳记录模式中的电流钳技术观察和记录士的宁对原代培养的昆明(KM)小鼠大脑皮层神经元动作电位的影响,检测士的宁是否对神经元兴奋性有明显的作用效果,并且初步探讨影响其兴奋性的离子通道。结果显示士的宁能够显著降低动作电位的阈值、电位峰值和增加时程宽度；降低动作电位重复放电频率；降低电压依赖性钾通道总电流。由此说明士的宁可以通过调节钾离子通道而提高皮层神经元兴奋性。延迟整流钾通道电流(IK)在动作电位复极化中后期起主要的作用,能终止动作电位和维持静息膜电位。本实验应用全细胞膜片钳技术,研究士的宁对其调节作用。首先研究士的宁对原代培养的KM小鼠皮层神经元细胞IK的调节作用,结果发现士的宁能浓度依赖性和电压依赖性地抑制IK且对其量效曲线进行分析得到IC50是1.16μM；士的宁能显著地影响IK的激活与失活动力学参数,使稳态激活与失活曲线均向左移。其次,以HEK293T为细胞模型,采用分子生物学技术,瞬时转染Kv2.1钾通道质粒到HEK293T细胞,研究士的宁对Kv2.1钾电流的影响及其调控作用机制,结果发现士的宁可以显著地抑制Kv2.1钾电流；加速Kv2.1钾通道的激活和失活过程；显著地影响Kv2.1电流的激活与失活动力学参数,使稳态激活和失活曲线均向左动。瞬时外向钾通道电流(IA)在动作电位复极化早期起主要作用,能调节神经元的重复放电频率和影响动作电位的产生,所以结合全细胞膜片钳技术,研究士的宁对其调节作用。首先研究士的宁对原代培养的KM小鼠皮层神经元细胞IA的调节作用,结果显示士的宁能浓度和电压依赖性地抑制IA的电流峰值；能显著地影响IA的激活动力学参数,使稳态激活曲线向左移,但是对稳态失活曲线却没有影响；还能影响失活后恢复的时间常数,使失活后恢复曲线右移,延缓了通道从失活状态的恢复。其次,以HEK293T为宿主细胞,采用瞬时转染Kv4.3钾通道质粒到HEK293T细胞,观察和记录士的宁对Kv4.3的作用效果,结果发现士的宁能够显著地抑制Kv4.3电流幅度,对Kv4.3的稳态激活和失活后恢复曲线也有显著的影响；但是对稳态失活曲线没有影响。以上结果表示,士的宁对大脑皮层具有的兴奋性调节作用在一定程度上是通过延迟整流型钾电流和瞬时外向钾电流协同作用的结果。