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第一部分尿路上皮癌转移的临床研究[目的]总结尿路上皮癌转移相关的临床病理特征,探讨影响转移性尿路上皮癌(MUC)患者预后的因素。[方法]收集1997年1月至2015年2月中国医学科学院北京协和医院收治的153例MUC患者的病案资料,从三个方面进行分析：1.患者中71例为肾盂及输尿管癌(UTUC),82例为膀胱癌(UBC)。比较UTUC和UBC原发肿瘤、转移灶分布及转移间隔的差异,寻找影响转移间隔的潜在因素。2.对其中接受2个疗程以上化疗、随访资料完整的50例患者进行生存分析,探讨预后相关因素。3.总结发生骨转移的51例患者的临床特征,探讨影响其生存期的因素。[结果]1.在转移灶分布及脏器转移数量上,UTUC和UBC没有明显差异。两组中最常见的转移部位均为淋巴结,其次为肺、骨、肝及腹膜。但是,UTUC的原发肿瘤更具侵袭性,中位转移间隔也明显短于UBC(5.8 vs.17.4个月,P<0.001)。单因素分析表明,病理分期(pT4 vs.pTa-3,P=0.037)是影响UTUC转移间隔的唯一因素。多因素分析结果显示,原发肿瘤的病理级别是UBC转移间隔的独立危险因素(HR6.384,95% CI 3.21～12.69,P<0.001),而复发为UBC转移间隔的独立保护因素(HR0.384,95% CI 0.18～40.82,P=0.014)。2.接受2个疗程以上化疗的50例MUC患者中位生存期为17.2个月,1年生存率为68.0%,2年生存率为24.0%。在单因素分析中,脏器转移(P=0.032)、骨转移(P=0.005)、转移方式(P=0.024)、脏器转移数(P=0.032)、ECOG评分(P<0.001)、原发灶切除(P<0.001)、化疗疗程(P<0.001)均与MUC患者的预后相关。多因素分析表明,影响接受2个疗程以上化疗的MUC患者生存期的独立危险因素为：骨转移(HR 2.384,95%CI1.178～4.824, P=0.016)、ECOG评分≥2(HR 5.488,95%CI2.249～13.395,P<0.001)、化疗疗程<52.498,95%CI1.033-6.040, P=0.042)。3.尿路上皮癌患者最常见的骨转移部位为盆骨、肋骨、腰椎及胸椎。患者从诊断原发肿瘤到骨转移的中位时间为13.0个月,从确定骨转移到死亡的中位时间为8.0个月。尿路上皮癌骨转移患者的的1年和2年生存率分别为31.4%和9.8%。在单因素分析中,骨转移方式(P=0.018)、原发肿瘤切除(P=0.010)、 ECOG评分(P=0.001)和化疗(P=0.028)均与尿路上皮癌骨转移患者的预后相关。多因素分析表明,同时性骨转移(HR 2.558,95%CI1.176-5.556, P=0.018)和ECOG评分≥2(HR 3.030,95%CI 1.536-5.988, P=0.001)是影响尿路上皮癌骨转移患者生存期的独立危险因素。[结论]1.UTUC和UBC具有相似的组织嗜性,但UTUC的原发肿瘤更具侵袭性,转移间隔亦明显短于UBC,因此UTUC患者在进行根治性手术时应常规进行腹膜后淋巴结清扫。病理分期是与UTUC转移间隔相关的唯一因素,而病理分级及复发均为影响UBC转移间隔的独立因素。2.对于接受2个疗程以上化疗的MUC患者,骨转移、ECOG评分≥2、化疗疗程<5是影响预后的独立危险因素。3.骨转移方式、原发肿瘤切除、ECOG评分及化疗均与尿路上皮癌骨转移患者的预后相关,其中同时骨转移以及ECOG评分≥2是影响生存期的独立危险因素。第二部分尿路上皮癌转移相关microRNA的初步研究[目的]研究尿路上皮癌转移灶和原发肿瘤中microRNA表达的差异及miR-146b-5p对转移过程的影响,探讨相关的分子机制。[方法]1.利用microRNA芯片技术检测3例尿路上皮癌患者转移灶和原发肿瘤中microRNA的表达谱,从中筛选出差异表达的microRNA 。在22对石蜡样本中用qRT-PCR验证改变倍数较大的miR-142-3p及miR-146b-5p,并检测其在膀胱癌细胞系5637、T24中的表达水平。2.通过体外转染携带miR-146b-5p的慢病毒,上调膀胱癌细胞系5637、T24中miR-146b-5p的表达,并用qRT-PCR验证。划痕实验分析miR-146b-5p过表达对细胞迁移能力的影响,Transwell实验分析miR-146b-5p过表达对细胞侵袭能力的影响。3. Western Blot检测转染miR-146b-5p前后膀胱癌细胞系5637、T24中E-cadherin、 Vimentin蛋白的变化。[结果]1.以改变倍数>2和P<0.05为标准,我们发现尿路上皮癌转移灶中有32种microRNA表达上调,有19种microRNA表达下调。其中miR-146b-5p上调明显,相对于原发肿瘤改变6.3倍。qRT-PCR结果显示,miR-146b-5p在22对石蜡样本中的表达情况与芯片一致,在膀胱癌细胞系5637、T24中均为中等丰度表达。2.慢病毒感染后,膀胱癌细胞系5637、T24中的miR-146b-5p表达水平显著提高,分别上调18042倍和60倍。过表达miR-146b-5p能增强5637细胞的迁移能力,抑制5637、T24细胞的侵袭能力。3.5637细胞系转染前后均未检测到Vimentin的表达,T24细胞系转染前后均未检测到E-cadherin的表达。转染miR-146b-5p后,5637细胞的E-cadherin表达水平上调,而T24细胞的Vimentin表达水平下调。[结论]尿路上皮癌转移灶和原发肿瘤中的多种microRNA表达存在差异,其中miR-146b-5p表达明显上调,并具有促进迁移和逆转上皮间质转化的作用,在尿路上皮癌转移的器官黏附和定殖过程中可能发挥重要作用。