背景:暗色丝孢霉病(Phaeohyphomycosis),系暗色真菌引起的浅表组织,皮肤,角膜,皮下组织甚至系统性感染。暗色真菌通常为土壤腐生菌和植物病原菌,其孢子广泛存在于空气中,其中许多为实验室常见的污染菌,在人体表面可有短暂的停留。当机体免疫力低下,或患有糖尿病、白血病或长期服用免疫抑制剂、糖皮质激素时,病原菌可经肺,皮肤伤口进入人体引起感染,甚至可以经血液循环播散至全身引起系统性感染。其中一些具有亲神经性,易侵犯脑和脑膜,引起中枢神经系统病变。本文从1例引起皮下暗色丝孢霉病的帚霉新种的分离鉴定开始,围绕其表型特征、体外药敏、分子鉴定等方面进行了研究。第一部分:报告1例由帚霉新种所致的暗色丝孢霉病并对该菌进行分离鉴定和临床实验研究。患者男,52岁,左手侧缘疣状增生性斑块7年余。发病前虎口部有外伤史。期间曾予冷冻治疗,效不佳。查体:左手掌外侧缘境界清楚疣状高度增生性斑块,表面粗糙颗粒状,少量干燥性血痂,中央皮损部分消退呈环状。真菌镜检见细长分隔菌丝,未见硬壳小体;真菌培养可见生长缓慢的暗黑色菌落形成,表面形成放射状皱褶伴培养基开裂;组织病理学检查示表皮角化过度,假上皮瘤样增生,真皮内混合性炎症细胞浸润为主的感染性肉芽肿。基于ITS测序的BLAST分析显示该菌株位于帚霉属的独立分支。诊断:帚霉新种所致皮下暗色丝孢霉病。治疗采用斯皮仁诺(伊曲康唑)400mg/日和阿维A 20mg/日口服3个月后,皮损完全消退。随访半年无复发。第二部分:抗真菌药物体外对抗帚霉新种的敏感性及表型研究:将从临床患者皮损分离出的帚霉新种分别接种于不同培养基上,观察其菌落形态,生长速率。玻片小培养及扫描电镜镜下观察其菌丝及孢子形态。参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的针对产孢丝状真菌的M38-A2方案进行体外药敏试验。结果示:此帚霉新种在不同培养基上表现为不同形态的菌落,在GC培养基上生长最快,PDA、SDA、MEA培养基上产孢较多。玻片小培养示:淡棕色分支分隔菌丝,分生孢子梗直立,帚状枝疏散分布,瓶梗顶端产生长短不一、松散性分生孢子链。电镜示:末端膨大的瓶梗,成串的分生孢子链及帚状枝。温度耐受试验示此帚霉新种在37℃下生长良好。体外药敏试验结果示此菌株对伊曲康唑及特比萘芬敏感。第三部分:帚霉新种的分子鉴定:DNA提取、扩增及测序,将PCR扩增片段送到上海生工生物工程技术服务有限公司纯化并双向测序。随后将测序结果进行种系发生分析。ITS和LSU测序分别获得567 bp和580 bp的片段,相应序列结果已上传至GenBank,分别获得序列号KP764411和KR006348。基于ITS及LSU的序列结果与其近源的帚霉属菌种的序列资料构建种系发生树。结果显示该菌株位于帚霉属内单独分支上。结论:1.本病例为帚霉新种所致的暗色丝孢霉病,经伊曲康唑及阿维A治疗后完全好转。随访半年无复发。2.经表型观察,此帚霉新种在各培养基上生长情况各不相同;体外药敏试验示其对特比萘芬及伊曲康唑敏感。温度耐受试验显示37℃下培养7天可见菌落生长良好。3.分子鉴定:给予ITS及LSU测序结果构建种系发生树,结果显示该菌株位于帚霉属内独立分支上。