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番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, MDRV)是一种主要针对水禽的传染性病毒,其临床症状主要表现在肝、脾出现大量灰白或黄白色坏死点,该病毒给中国养禽业中造成了重大的经济损失。由于机体先天性免疫在防御病毒入侵中起到关键性的作用,人们越来越关注由病毒感染诱发的免疫应答机制。因为免疫应答是机体抵抗病毒入侵的第一道防线,所以有效地激活天然免疫应答一方面能直接清除病毒的感染,另一方面能促进抗病毒特异性免疫应答反应的建立。因此,研究由病毒感染诱发的天然免疫应答的调控机制具有重要意义。本研究主要运用RNA干扰技术构建稳定表达的细胞系sh-RIG-I, sh-MDA5, sh-TLR3, sh-Visa, sh-NF-KB, sh-IRF-7和sh-IRF-3。通过PCR及Western Blot技术检测干扰基因对MDRV感染诱导表达IFNs的影响；采用细胞转染实验,转染VG-RNA, viral RNA或cellular RNA,检测IFNs及ISG15的表达情况；使用体外干扰素刺激,观察其对MDRV复制的影响。得到以下结果：(1)293T细胞分别转染病毒基因组RNA (VG-RNA), MDRV感染24 h后的总RNA(Viral RNA)和没有感染MDRV的293T细胞RNA(Cellular RNA)4h,结果显示转染VG-RNA和Viral RNA的细胞,IFNs和ISG15的表达量显著升高。(2) MDRV感染sh-RIG-1、sh-MDA5及(sh-TLR3稳定表达细胞系后,与对照组相比(sh-Luciferase细胞系),干扰素的表达量显著下降；MDRV感染干扰Visa基因稳定表达的细胞系后,与对照组相比(sh-Luciferase细胞系),干扰素的表达受到显著抑制；MDRV感染IRF-7和IRF-3表达沉默的293T稳定细胞系后,与对照组相比(sh-Luciferase细胞系),sh-IRF-7稳定表达细胞系中IFN-β的表达量没有明显变化,IL-28A/B和IL-29表达量明显降低；在sh-IRF-3稳定表达细胞系中,干扰素表达没有明显变化；NF-kB抑制剂Bay预处理细胞2 h后,接种MDRV,与对照组相比(DMSO预处理细胞2 h),干扰素的表达受到显著的抑制。(3)体外合成干扰素预处理细胞不同时间(O h、3 h、6 h、 12 h)后,接种MDRV,结果发现MDRV复制量显著下降。(4) MDRV感染番鸭不同时间点后,检测机体上RIG-1, MDA5, TLR3和Ⅰ型干扰素表达情况,结果显示RIG-1, MDA5, TLR3和Ⅰ型干扰素的表达基本呈现升高后下降的趋势。