【摘 要】
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目的:本研究通过采用10mg/ml槟榔提取物（ANE）和中药加味丹玄口康作用于大鼠口腔黏膜组织,模拟咀嚼槟榔时唾液中的槟榔对口腔黏膜组织的作用以及药物的干预,检测大鼠口腔黏膜组织中SFRP1的表达,并观察加味丹玄口康干预的影响,探讨其作用机制。方法:选取25只SD大鼠,大鼠随机分组,A组为正常组,B组为OSF模型组,C组为加味丹玄口康低剂量组,D组为加味丹玄口康中剂量组,E组为加味丹玄口康高剂量组
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目的:本研究通过采用10mg/ml槟榔提取物（ANE）和中药加味丹玄口康作用于大鼠口腔黏膜组织,模拟咀嚼槟榔时唾液中的槟榔对口腔黏膜组织的作用以及药物的干预,检测大鼠口腔黏膜组织中SFRP1的表达,并观察加味丹玄口康干预的影响,探讨其作用机制。方法:选取25只SD大鼠,大鼠随机分组,A组为正常组,B组为OSF模型组,C组为加味丹玄口康低剂量组,D组为加味丹玄口康中剂量组,E组为加味丹玄口康高剂量组,每组各5只。A组不做处理,其他B、C、D、E四组SD大鼠槟榔提取物造模8周。8周之后,A组和B组大鼠灌胃蒸馏水4周,C、D、E组SD大鼠分别灌胃低剂量加味丹玄口康、中剂量加味丹玄口康、高剂量加味丹玄口康4周。分别于治疗前、治疗2周、4周观察大鼠张口度和颊黏膜评分的变化。给药4周之后,处死动物,采集口腔颊黏膜组织标本备用。观察大鼠口腔张口度和颊黏膜评分。采用HE染色法来观察大鼠颊黏膜具体病理变化情况;采用免疫组化法和蛋白免疫印迹法来检测SFRP1、β-catenin蛋白的表达情况,PCR检测SFRP1、P53基因的表达情况。结果:（1）加味丹玄口康高剂量组大鼠在不同时期的张口度和颊黏膜评分优于OSF模型组、加味丹玄口康低、中剂量组,差异有统计学意义（P＜0.05）,最接近正常组。（2）HE染色结果显示:正常组大鼠和加味丹玄口康高剂量组大鼠口腔颊黏膜上皮皮质层表现为淡红色均质状,基底层、棘细胞层和粒层细胞清晰,未见炎症细胞浸润;加味丹玄口康中剂量组大鼠颊黏膜纤维明显改善,上皮层结构恢复,有少量炎症细胞浸润;OSF模型组、加味丹玄口康低剂量组大鼠颊黏膜上皮层结构紊乱,固有层下肌纤维萎缩,有大范围的粉红色致密沉积物,。（3）免疫组化结果显示:与正常组相比,OSF模型组大鼠SFRP1阳性表达减弱,β-catenin阳性表达增强;与OSF模型组相比,加味丹玄口康高剂量组SFRP1阳性表达增强,β-catenin阳性表达减弱;低剂量组SFRP1和β-catenin阳性表达强度与OSF模型组无明显差异。（4）蛋白免疫印迹法（Western blot）法结果显示:与OSF模型组、加味丹玄口康低、中剂量组和高剂量组相比,加味丹玄口康高剂量组SFRP1蛋白表达水平更高,β-catenin蛋白表达水平更低,差异有统计学意义（P＜0.05）;（5）RT-q PCR结果显示:OSF模型组、加味丹玄口康低、中剂量组的P53的表达水平高于加味丹玄口康高剂量组和正常组,SFRP1低于加味丹玄口康高剂量组和正常组;加味丹玄口康高剂量组的SFRP1和P53蛋白的表达水平与正常组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:（1）10mg/ml槟榔提取物作用于大鼠口腔黏膜组织,可使大鼠颊黏膜上皮层结构紊乱,固有层下肌纤维萎缩,有大范围的粉红色致密沉积物,炎症细胞浸润。（2）加味丹玄口康能改善槟榔提取物诱导的大鼠口腔黏膜下纤维化程度,显著升高组织中的SFRP1的表达,降低细胞质内β-catenin的表达,调控P53基因的表达。（3）SFRP1可能与口腔黏膜下纤维化相关,SFRP1通过竞争性结合Wnt蛋白的结合位点,或者直接与Wnt蛋白结合,从而抑制Wnt信号通路的传递。通过加味丹玄口康提升SFRP1的表达可能是加味丹玄口康治疗或改善OSF发生发展的机制之一。
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