人肺癌相关抗原ALT04ag基因的分子克隆、生物信息分析及其功能的初步研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:scetc203
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ALT-04是本研究室建立的一株具有较高特异性的抗人肺癌单抗,已成功用于实验动物体内的肿瘤呈像。此后我们克隆了该肺癌相关抗原ALT04ag的部分cDNA片段并证明是一新的cDNA序列,该片段具有一定的转化活性。本文目的于进一步克隆ALT04ag cDNA全长,对其结构和功能进行初步分析,以期为肿瘤发生、发展机理的研究提供有用的线索。本文的研究工作主要分以下几方面 1、用5’RACE法克隆了ALT04ag cDNA全长,以生物信息学方法对其进行同源性、分子量、蛋白跨膜区、功能位点、等电点、亲疏水性、蛋白二级结构、抗原决定簇等项的分析和预测。结果显示,ALT04ag cDNA全长1115bp,编码一194氨基酸残基的蛋白,可能为一跨膜蛋白,经基因Genebank查询发现与登录号为AF219116的cDNA序列有一定的同源性。 2、构建ALT04ag cDNA真核表达质粒并转染正常小鼠成纤维细胞C3H10T1/2。实验证明基因稳定整合的转染细胞增殖速率加快,具有成瘤性。转染后除ALT04ag表达外,还有c-myc基因表达上调,而p53、bcl-2基因表达变化不大。 3、构建反义ALT04ag cDNA真核表达质粒以此转染人肺鳞癌细胞L78,稳定整合后引起细胞生长抑制、成瘤性丧失。用基因芯片及RT-PCR分析进一步证明反义ALT04ag cDNA可下调增殖相关基因、上调生长抑制基因,并影响一些其他相关基因的表达。 4、以DFMO处理人肺鳞癌细胞L78后抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。相关基因表达的检测表明,DFMO不仅使肺癌相关抗原ALT04ag基因表达下降,且可下调L78细胞的其他增殖相关基因、凋亡抑制基因及肿瘤转移相关基因、上调凋亡相关基因,并影响一些其他相关基因的表达。
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