鲤肠道优势菌对其免疫功能的影响

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目前,水产养殖中应用的大多数益生菌为外源性微生物,主要来自水体环境、食品微生物或畜禽EM,而对水产动物肠道土著微生物的研究与应用比较薄弱,特别对肠道优势菌群影响水产动物免疫功能和抗病力的研究较少。因此,本试验选对鲤肠道正常菌群结构进行分析,分离得到肠道优势菌,通过体外溶血性试验和安全评价试验得到3株优势菌株。通过饲料中分别添加活菌株及其代谢产物,研究其对鲤非特异性免疫应答和抗病力的影响,为鲤专用微生物制剂的开发提供理论基础。该研究为实现鲤绿色养殖具有重要的指导意义。本研究取得如下结果:1.本试验比较分析了投喂组和饥饿组鲤(Cyprinus carpio)不同个体间肠道菌群数量和种类组成,并通过生理生化鉴定对360株肠道土著菌群进行了分离鉴定。结果表明:鲤肠道菌群由7个属的菌组成,分别属于弧菌属(Vibrio)、黄杆菌属(Flavobacterium)、希瓦式菌属(Shewanella)、气单胞菌属(Aeromonas)、微球菌属(Micrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)。其中,优势菌为气单胞菌属(Aeromonas)、弧菌属(Vibrio)和黄杆菌属(Flavobacterium)。2.通过溶血试验从对分离得到的优势菌气单胞菌属(Aeromonas)、弧菌属(Vibrio)、黄杆菌属(Flavobacterium)对进行体外溶血试验,筛选得到没有溶血性的菌株BA-1、BA-2和BA-3作为试验菌株,进一步通过注射攻毒试验对筛选出的优势菌株进行安全评价检测,最后通过16S rDNA和生理生化鉴定进一步鉴定为Aeromonas veronii BA-1,Vibrio lentus BA-2和Flavobacterium sasangense BA-3。3.将以上3株试验菌株进行为期7天的发酵,得到发酵产物,再干燥、甲醇萃取去除蛋白质得到3株菌的胞外代谢产物。为了揭示其对鲤免疫相关的影响,将潜在益生菌BA-1、BA-2和BA-3活菌体(1×108cfu/g)以及胞外代谢产物(1%)添加到饲料中饲养鲤28d,测定投喂后的第7、14、21和28d的鲤的免疫相关指标(血清溶菌酶活力、补体C3、呼吸爆发力、吞噬细胞活性血清总蛋白、白蛋白和球蛋白水平)、对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)抗感染力和免疫基因(IL-1β、TNF-α和Lysozyme-C)的表达。结果表明,益生菌BA-1和BA-3活菌体组及其胞外代谢产物投喂组的鲤的先天免疫指标显著增强(P<0.05);免疫相关基因的相对表达量在试验的第7、14和21天显著上调;被病原菌嗜水气单胞菌感染时的存活率也显著提高(P<0.05)。因此,试验结果表明:2株在鲤肠道中分离得到的优势菌A. veronii BA-1和F. sasangense BA-3可以对鲤先天免疫应答产生积极的影响,并且可以提高其对病原菌嗜水气单胞菌的抗感染力。因此,可以得出结论:鲤肠道优势菌气单胞菌A.veronii BA-1和黄杆菌F. sasangenseBA-3能够增强鲤免疫功能及抗病力,可以进一步开发为鲤专用益生菌。
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