刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa）经有氧发酵可产生胞内次级代谢产物-多杀菌素。多杀菌素兼有生物农药的安全性和化学合成农药的速效性以及对哺乳动物、鱼类、鸟类和大多数益虫具有极高的安全界限等优点，因此开发该产品具有很好的经济效益和社会效益。本文利用课题组前期通过不同物理化学诱变和分子生物学方法获得的八株高产多杀菌素的刺糖多孢菌为出发菌株，通过3轮基因组重排获得多杀菌素高产菌株。在此基础上，利用大孔树脂吸附结合硅胶柱层析技术对发酵液中多杀菌素的分离纯化进行研究。最后以多杀菌素为原药，制备出符合粮库要求的储粮防护新制剂。主要研究结果如下：1、以8株刺糖多孢菌为出发菌株，采用96孔板发酵培养结合生物检测的高通量筛选方法，探索了原生质体制备、再生、双亲灭活和原生质体融合等条件，并通过3轮基因组重排获得了多杀菌素高产菌株。结果表明：当菌龄为65h、溶菌酶浓度为4.00mg/mL，39℃处理时间20min时，原生质体的制备率及再生率分别为92.30%和7.66%；60℃恒温水浴90min以上和紫外照射200s以上为双亲灭活条件；PEG浓度为50%，在32℃下处理15min时，原生质体融合率约为1.18%。最终获得1株产量较出发菌株提高了36.07%且遗传稳定的融合株。2、利用大孔树脂吸附结合硅胶柱层析技术对发酵液中多杀菌素的分离纯化进行了研究。考察了提取溶剂、发酵液pH和料液比对浸提多杀菌素的影响；并对7种不同极性的大孔吸附树脂进行了静态和动态吸附性能的研究，考察了不同吸附、解吸条件对大孔吸附树脂性能的影响，最后对硅胶柱层析法精制多杀菌素的工艺条件进行了探索。结果表明：当发酵液pH为8.0，料液比1:3（g:v）时，乙醇可高效浸提多杀菌素；大孔吸附树脂DM11对多杀菌素的静态吸附量和解吸率分别为12508.00μg/g（湿树脂）和93.47%；大孔树脂动态吸附最佳pH为9.0，最佳载样比是多杀菌素质量（mg）：树脂体积（mL）为2.5:1；采用70.00~95.00%乙醇梯度洗脱，多杀菌素洗脱率为97.50%；多杀菌素精制时硅胶柱以石油醚/乙酸乙酯/甲醇（2:1:0.2（v/v/v）和1:1:0.25（v/v/v））为洗脱剂进行分段洗脱。该工艺得到的多杀菌素回收率为67.25%，纯度为90.58%。3、以多杀菌素为原药，通过检测微乳剂热贮、冷贮、常温稳定性和分散性以及原料成本等指标对多杀菌素微乳剂的配方进行筛选。结果表明：以3.00%二甲苯为助溶剂，7.00%聚氧乙烯脂肪酸酯与聚甘油脂肪酸酯为乳化剂，6.00%的丙三醇为防冻剂，0.80%的六偏磷酸钠以及0.30%的羧甲基纤维素钠（CMC）为增稠剂，蒸馏水补足可制备出1.00%的多杀菌素微乳剂。