阿维菌素高产菌株的选育和透明颤菌血红蛋白基因的克隆表达研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:echo_seaman
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
阿维链霉菌是阿维菌素的产生菌,由于其发酵液较粘稠而导致溶氧较差,因此溶氧成为阿维菌素产量提高的限制因素之一。本研究旨在通过在阿维链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白基因(vgb)来改善氧的传递,进而改善菌体生长,提高阿维菌素的产量。 对阿维链霉菌原生质体的制备和再生条件进行优化。首先考察了影响阿维链霉菌原生质体形成的因素,发现在R2YE、YMB、SM、YEME几种链霉菌常用的液体培养基中,通过R2YE培养基收获的菌体形成原生质体的效率最高。菌丝培养采用二级培养,即用R2YE培养基28℃培养48h,转种到补加0.25%甘氨酸的R2YE培养基中,28℃继续培养20~24h,溶菌酶作用浓度为2mg·mL-1,30℃酶解30min,在此条件下,原生质体的制备量为6.3×108个·mL-1原生质体的再生率最高,达到1.98%。 应用双亲灭活原生质体融合技术选育阿维菌素高产菌株,得到了一株高产菌株Streptomyces avermitilis F32,阿维菌素总发酵单位达3904μg·mL-1,其中B1a组分产量较高,达1016μg·mL-1,较出发菌株产抗单位提高了117.1%。 利用链霉菌质粒pIJ702和带vgb的大肠埃希菌质粒pUC19-vgb,构建大肠埃希菌-链霉菌穿梭质粒pSY702。将该质粒以PEG-介导的方式转入阿维链霉菌原生质体中,利用硫链丝菌素抗性筛选转化子。CO结合差光谱法检测在420nm处有吸收峰,表明血红蛋白已在阿维链霉菌中表达且具有生物活性。通过高效液相色谱(HPLC)对转化子摇瓶发酵产物进行分析表明,转化子仍然合成阿维菌素,而且转化子在供养不足时生产阿维菌素的能力比对照更强。说明含vgb的转化子比不含vgb的对照菌更能耐受贫氧环境,合成阿维菌素效率更高,在贫氧环境中表现出其优越性。 以筛选到的转化子S.avermitilis T26为实验菌株,对发酵条件进行优化。结果表明随着发酵时间的延长,阿维菌素产量不断提高,发酵10d阿维菌素的产量最高;选用18h的种龄、15%的转种量可使阿维菌素的产量提高。通过均匀设计优化发酵培养基配方,发酵培养基(%)为:玉米淀粉8.0,黄豆饼粉0.7,花生饼粉1.1,酵母粉0.875,酵母膏0.2,玉米浆0.35时,使得S.avermitilis T26的发酵效价提高了38%,B1a发酵单位达到1206μg.mL-1
其他文献
研究背景:甲状腺髓样癌来源于分泌降钙素的甲状腺滤泡旁细胞(c细胞),约占全部甲状腺癌的5-10%,其恶性程度介于分化性甲状腺癌与甲状腺未分化癌之间,预后相对较差,其死亡率约占
随着碾压混凝土技术的不断推广,对碾压混凝土的防渗措施和材料也提出了更高的要求。山仔碾压混凝土重力坝上游防渗体的选择与设计,具有一定的特点。
本文结合国内外现有研究和多国银行监管体制改革实践,对银行监管体制进行了系统性分类研究,并通过定性和定量分析研究了我国银行监管体制的目标实现效果及存在的相关问题,给
期刊
针对目前燃煤锅炉产生的二氧化硫造成日益严重的大气污染,在国家政策的干预下,各有关厂矿企业纷纷开始进行脱硫设备安装或改造。烟气脱硫过程工艺是过程工业的重要组成部分,属于
随着高校的扩招,我国的高等教育进入了一个大众化、普通化的发展阶段。但目前的教学模式,存在很大的弊端和缺陷。案例教学法以其显著的教学效果引起学者、专家的广泛关注,成
设计实现了一套涡流热成像无损检测系统,对试件进行涡流加热,使用热像仪进行探测,以热图像的形式展示试件温度变化情况来表征试件的损伤特征,并使用基于深度学习网络的智能识
本文对国标法水产品组胺测定中 ,标准管和样品管盐酸量不一致的问题进行了一系列的实验 ,发现本实验的酸碱度很重要 ,过量的盐酸会使测定的灵敏度下降 ,结果明显偏低。并提出
化学改进技术是一种在线化学处理技术,既利用了常规化学处理消除干扰、提高测定灵敏度的优点,又避免了常规化学处理费时费力、易玷污和损失的缺点,广泛地应用于电热原子吸收
平凉市煤炭资源丰富,煤电产业是该市的支柱性产业。近些年来,平凉市煤电产业生产规模化程度偏低、产业链条短、连接外部市场的通道不畅、资源环境约束趋紧等问题凸显,严重制