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人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)是端粒酶的核心催化亚单位,在端粒酶活性发挥中起关键作用。正常体细胞中检测不到端粒酶活性或其活性很低,而在生殖细胞和胚胎干细胞中端粒酶活性常呈增高。至少80%的人类肿瘤可以观察到由端粒酶调控异常导致的酶活性异常增高。hTERT表达升高被认为是细胞永生化和肿瘤发生、进展的标志性指标。肿瘤细胞能够特异性地利用多种转录因子与hTERT启动子的结合促进hTERT基因在肿瘤细胞中的高表达。研究表明,端粒酶在结肠癌演变中具有重要的作用。因此,发现并鉴定结肠癌细胞中能够特异性地与hTERT启动子结合的调控蛋白,研究其功能,对于了解结肠癌发生、发展机制具有重要意义。目的在人结肠癌细胞中我们发现了一个新的肿瘤特异性hTERT启动子结合蛋白SUPT5H,通过相关实验研究该蛋白的功能并阐明其与结肠癌发生和发展的可能机制。方法以人结肠癌细胞株为模板,运用链霉亲和素-琼脂糖珠垂钓法及染色质免疫共沉淀垂钓、鉴定和验证SUPT5H为新的hTERT启动子结合蛋白；应用免疫印迹技术检测人正常结肠上皮细胞株和结肠癌细胞株核中SUPT5H蛋白的表达；利用RT-qPCR和免疫组化技术检测人结直肠癌组织和正常结直肠组织中SUPT5HmRNA和蛋白的表达；应用hTERT启动子报告基因研究SUPT5H蛋白对hTERT启动子活性的影响；应用基因转导和shRNA干扰技术特异性地抑制结肠癌细胞株SUPT5H蛋白的表达,研究SUPT5H蛋白对结肠癌细胞增殖、衰老和凋亡等生物学功能的影响。结果与人正常结肠上皮细胞株细胞核内SUPT5H蛋白表达水平相比较,结肠癌细胞株核内该蛋白呈现明显的高表达。人结直肠癌组织中,观察到SUPT5H在mRNA和蛋白水平显著的高表达。SUPT5H蛋白表达水平与结直肠癌远处转移正相关。利用SUPT5H基因特异性短发夹RNA抑制内源性SUPT5H的表达能够减弱hTERT启动子驱动的绿色荧光蛋白的表达,但对CMV启动子驱动的绿色荧光蛋白的表达未显现出减弱的作用。干扰SUPT5H的表达不仅能够有效地抑制结肠癌细胞端粒酶的活性、细胞的生长和迁移,还能促进细胞衰老。结论SUPT5H是人结肠癌细胞中一个新的肿瘤特异性端粒酶逆转录酶启动子结合蛋白。SUPT5H过表达激活了hTERT基因的转录。在人结直肠癌组织中,观察到SUPT5H显著的高表达。抑制结肠癌细胞SUPT5H的表达,展现出一定的抗肿瘤作用。SUPT5H可能作为结直肠癌一个新的肿瘤标志物和／或治疗靶点。