巨噬细胞具有可塑性,在不同条件下可分化成M1型或M2型。M1型巨噬细胞释放较高水平的TNF-α、IL-6和IL-1β等促炎因子,对肿瘤的增殖具有抑制作用;M2型巨噬细胞释放较高水平的IL-4、IL-8和IL-10等抑炎因子,可促进肿瘤的增殖与血管生成。结肠癌是困扰人类健康的疾病之一,其发生、发展与机体的反应尤其是肿瘤微环境中的反应密切相关。存在于肿瘤微环境中的巨噬细胞——肿瘤相关性巨噬细胞（TAMs）大部分为M2型。因此,研发可以将M2型巨噬细胞转化为M1型的有效药物成为目前的研究热点。蜜环菌是一种常见的食用真菌,蜜环菌多糖具有多种生物学活性。前期研究发现蜜环菌多糖AAMP-A70对正常细胞无细胞毒性,并且可以活化巨噬细胞。但目前有关于蜜环菌多糖影响巨噬细胞极化及抗肿瘤的研究较少。本论文采用已知结构的蜜环菌葡聚糖级分AAMP-A70,研究其对TAMs（即M2型巨噬细胞）极化的影响和机制,以及进一步对结肠癌增殖和凋亡的影响。首先,我们用鼠源单核巨噬细胞系RAW264.7和人源单核细胞系THP-1建立了M0型、M2型和M1型巨噬细胞诱导方法。通过研究AAMP-A70对M2型巨噬细胞极化的影响,发现AAMP-A70能够下调Arg-1、CD206、VEGF等M2型特异性标志物的表达,并促进TNF-α、IL-6、IL-1β等M1型特异性标志物的表达,说明AAMP-A70可以抑制M2型巨噬细胞极化,并促进其向M1型转化。其次,为了研究AAMP-A70促进M2型巨噬细胞向M1型转化的作用机制,我们分别检测了NF-κB、Akt和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果表明AAMP-A70可以明显抑制M2型巨噬细胞标志蛋白CD206的表达,并促进M2型巨噬细胞中NF-κB、Akt、ERK和JNK的活化。为进一步验证这一结果,我们分别用NF-κB、Akt、ERK和JNK的抑制剂（BAY11-7082、LY294002、U0126和SP600125）处理细胞,发现抑制各蛋白活化后,AAMP-A70抑制M2型巨噬细胞CD206表达的作用减弱。说明AAMP-A70可以通过NF-κB、Akt、ERK以及JNK信号通路抑制M2型巨噬细胞的极化。同时我们发现,当Akt、ERK和JNK的活化被抑制后,AAMP-A70引起的NF-κB的活化也被抑制;但抑制NF-κB的活化对AAMP-A70引起的Akt、EKR和JNK的活化无影响。说明Akt、EKR和JNK是NF-κB通路的上游。此外,本实验室前期研究发现Toll样受体2（TLR2）是AAMP-A70活化巨噬细胞的受体,因此我们采用TLR2的封闭性抗体和抑制剂C29分别处理M2型巨噬细胞,发现当TLR2被封闭或抑制后,AAMP-A70抑制M2型巨噬细胞标志蛋白CD206表达的作用减弱,说明TLR2为其受体。最后,我们将各组培养上清与结肠癌细胞DLD-1或HCT116共培养。MTT实验和结晶紫染色实验结果显示:AAMP-A70对结肠癌细胞无细胞毒性;M1型巨噬细胞可以明显抑制结肠癌细胞的增殖,并促进其凋亡;M2型巨噬细胞对结肠癌细胞的增殖和凋亡无影响,但是经AAMP-A70处理后,则可以明显抑制结肠癌细胞的增殖,并促进其凋亡。这一结果说明AAMP-A70可以通过促进M2型巨噬细胞向M1型转化发挥抑制结肠癌细胞增殖的作用。另外我们发现抑制NF-κB、Akt、ERK和JNK的活化或者用TLR2的封闭性抗体或抑制剂处理M2型巨噬细胞后,AAMP-A70通过促进M2型巨噬细胞向M1型转化发挥抑制结肠癌增殖的作用被减弱,进一步说明AAMP-A70可以通过TLR2受体活化Akt/NF-κB、ERK/NF-κB和JNK/NF-κB通路促进M2型巨噬细胞向M1型转化,发挥抑制结肠癌细胞增殖的作用。综上所述,本论文选用M2型巨噬细胞模拟肿瘤相关性巨噬细胞TAMs,研究并发现无细胞毒性的蜜环菌多糖AAMP-A70可以通过TLR2受体活化Akt/NF-κB、ERK/NF-κB和JNK/NF-κB通路,促进M2型巨噬细胞向M1型转化,从而抑制结肠癌细胞的增殖,并促进其凋亡。