牛气管防御素(bovine tracheal antimicrobial peptide，bTAP)是由美国科学家Diamond等从牛气管黏膜上皮细胞中分离得到的一种阳离子型的抗菌活性小肽，体外实验表明bTAP具有广谱抗菌活性，对细菌与真菌均具有杀伤作用，但机理不同于抗生素，不易产生耐药菌株。因此，在医药、食品、农业等领域具有很高的应用价值。利用基因工程技术培育转防御素基因动物已经成为人们研究的热点。　　 本研究采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增到114 bp的TAP基因，分析序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性，人工合成牛TAP基因，构建pET32a(+)-TAP重组质粒，进行原核表达，SDS-PAGE与Western-Blot检测重组融合蛋白成功表达，蛋白分子量为24 KD，在大肠杆菌中可以高效表达，滤纸片法检测表达目的蛋白具有明显的抗金黄色葡萄球曲的活性，并研究组织分布，牛TAP基因在体内多个组织中表达。同时构建了真核表达载体FG9-TAP与pcDNA3.1(+)-TAP，脂质体法转染293T细胞进行瞬时表达，斑点ELISA检测结果为重组真核表达载体成功表达。采用胶原酶消化法和组织块贴附法培养2-3月龄牛胎儿成纤维细胞，细胞状态良好，传代稳定。该实验为构建稳定表达牛气管防御素的胎儿成纤维细胞系奠定了基础。并为培育抗金黄色葡萄球菌的转基因奶牛奠定了基础。