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目的:1.建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定丹参饮中四种酚性成分丹参素(DSS)、原儿茶酸(PCC)、原儿茶醛(PCL)和丹酚酸B(Sal B)的含量。2.研究这四种酚性成分对棕榈酸钠(SPA)刺激的人脐静脉细胞融合细胞(EA.hy926)表达细胞间黏附分子(ICAM-1)的影响及其作用机制。方法:1.建立HPLC法测定丹参饮中四种酚性成分的含量:采用Genmini5μm C18 110A(250×4.60mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.05%三氟乙酸(B)溶液为流动相,梯度洗脱(0~7min,2%A→10%A;7~20min,10%A→23%A;20~35min,23%A→27%A;35~38min,27%A→38%A;38~42min,38%A;42~43min,38%A→2%A;43~56min,2%A),流速0.8ml/min,柱温为25℃,检测波长288nm,进样量15μl。然后进行方法学验证,最后测定丹参饮中四种酚性成分的含量。2.四种酚性成分对SPA诱导EA.hy926表达ICAM-1的影响。设置对照组、模型组、受试药组、阳性对照药组。对照组以牛血清蛋白(BSA)处理(不用SPA刺激),模型组和受试药组用SPA刺激,同时受试药组给予四种酚性成分的高、中、低三个剂量,阳性药对照组以普罗布考(Pro)处理,各组均处理24h。(1)分别采用噻唑蓝法(MTT法)、流式细胞术(FCM)和油红染色法研究SPA和四种酚性成分对EA.hy926的生存率、凋亡和形成泡沫细胞的影响。(2)采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白免疫印迹法(WB)研究SPA刺激EA.hy926表达ICAM-1蛋白的量效和时效关系。(3)采用ELISA和WB法研究四种酚性成分对SPA刺激EA.hy926表达ICAM-1蛋白的影响。3.SPA诱导EA.hy926表达ICAM-1的机制研究。设置对照组、模型组、TLR2和TLR4激动剂(脂多糖(LPS))组、TLR4抑制剂(TAK-242)组和MyD88抑制剂(ST2825)组。对照组以BSA处理,模型组、激动剂组和抑制剂组用SPA刺激,同时激动剂组和抑制剂组给予高、中、低三个剂量的LPS、TAK-242和ST2825,各组均处理24h。(1)采用MTT法研究LPS、TAK-242和ST2825对EA.hy926生存率的影响。(2)采用ELISA和WB法研究LPS、TAK-242和ST2825对SPA刺激EA.hy926表达ICAM-1的影响。结果:1.在40min内,丹参饮中DSS、PCC、PCL、Sal B四种酚性成分能够实现完全分离,并且浓度与峰面积在一定范围内线性关系良好,相关系数r≥0.9998。2.随着浓度和作用时间的增加,SPA降低EA.hy926生存率、促进EA.hy926凋亡和促进EA.hy926形成泡沫细胞的作用显著增强。四种酚性成分能够提高EA.hy926生存率,降低SPA刺激EA.hy926形成泡沫细胞的作用。DSS和Sal B降低SPA诱导的EA.hy926凋亡。随着浓度和作用时间的增加,SPA促进EA.hy926表达ICAM-1的作用增强。四种酚性成分能够明显降低SPA刺激组ICAM-1、P65、MyD88、TLR1、TLR2、TLR4、TLR6的表达。3.与SPA刺激组相比,LPS促进了ICAM-1、P65、MyD88、TLR2、TLR4的表达,TAK-242抑制ICAM-1、P65、MyD88、TLR4的表达,ST2825抑制ICAM-1、P65、MyD88的表达。结论:1.该高效液相色谱法专属性好,定量准确,经方法学验证可用于测定丹参饮中四种酚性成分的含量。2.SPA促进EA.hy926形成泡沫细胞,SPA可能通过TLRs/MyD88/NF-κB通路促进EA.hy926表达ICAM-1。四种酚性成分能够提高EA.hy926的生存率,Sal B和DSS抑制EA.hy926的凋亡,四种酚性成分能够抑制SPA诱导的EA.hy926泡沫细胞的形成,降低细胞ICAM-1、P65、MyD88、TLR1、TLR2、TLR4、TLR6的表达,可能与抑制TLRs/MyD88/NF-κB通路有关。