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鹅细小病毒(Goose Parvovirus, GPV)为小鹅瘟的病原体。小鹅瘟主要发生于1月龄内雏鹅和雏番鸭，是以急性肠炎及肝、肾、心实质脏器炎症为特征的烈性传染病，对养鹅业发展造成很大威胁。自1956年我国学者方定一首次发现并分离到GPV后，国外相继也有分离到该病毒的报道，说明该病毒在世界范围内有较为广泛的流行。利用PCR方法扩增和克隆GPV H1分离株主要免疫原性蛋白基因VP3，并对其进行原核和真核表达，是建立小鹅瘟分子诊断方法、构建VP3基因重组禽痘病毒活载体疫苗的基础，具有极为重要理论和实践意义。 本研究用接种鸭胚的病毒增殖方法获得了GPV H1分离株的大量增殖，增殖病毒经差速离心进行纯化。根据Zadori等发表的GPV B株全基因核苷酸序列，借助Oligo4.1软件设计了1对用以扩增主要结构蛋白VP3基因的引物GF/GR，通过PCR技术，从病毒基因组DNA中扩增出病毒主要结构蛋白VP3完整基因片段，经酶切鉴定后直接与pMD 18-T质粒载体连接。提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后，对插入片段进行序列测定及分析。结果表明：鹅细小病毒H1分离株VP3基因全长1605bp，编码534个氨基酸，只有一个完整的开放阅读框架，与国外已发表的鹅细小病毒B株核苷酸序列同源性为98.5％，氨基酸序列同源性为98.3％，表明这二个毒株亲缘关系相近。该序列与国外发表的GPV B株VP3基因核苷酸序列相比较，共有24个核苷酸不同。除个别突变点外，大多数变异集中在两个区域，VP3基因5’端312bp-417bp区和3’端791bp-1276bp区，由该序列推导的氨基酸序列与GPV B株有9个氨基酸发生改变，集中在266位和417位氨基酸之间，这一区域可能是VP3基因的高变区。 本研究另从含有GPV H1分离株主要结构蛋白VP3基因的重组质粒pPROEX HTb-VP3中切取GPV H1株VP3基因片段，将其亚克隆于pSY538的EcoRI位点，然后将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ报告基因平端克隆于上述重组子的SmaI位点，再用NotI切下同时含有VP3基因和LacZ报告基因的片段，再亚克隆于pSY681的NotI位点，构建出含有VP3基因的重组禽痘病毒转移载体，为构建表达VP3基因的重组禽痘病毒从而制备GPV基因工程疫苗奠定了基础。