论文部分内容阅读
目的：建立耐高三尖杉酯碱SKM-1细胞系,初步探讨该细胞系的生物学特性及多药耐药机制。方法：通过较大剂量间断冲击诱导法(pulsatile treatment)逐渐增加药物浓度的方法建立耐高三尖杉酯碱SKM-1细胞系。光学显微镜观察耐药细胞系和亲本细胞系的一般形态学变化,MTT法测定倍增时间和耐药指数,绘制生长曲线；利用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞内柔红霉素含量；常规遗传学方法R显带后进行核型分析；观察两种细胞在裸鼠成瘤的差异；多药耐药相关基因(mdr-1及MRP)及topo-IIa的表达采用RT-PCR方法检测。结果：历经7个月的培养,建立了耐药细胞系SKIM-1/HHT,并对耐药细胞进行生物学特性观察。形态上,耐药细胞与亲本细胞相似,悬浮生长,细胞大小不均一,体积偏大,核浆比例高,胞浆及胞核内见空泡；耐药及亲本细胞免疫表型近似：SKM-1细胞为CD2-、CD3-、CD4-、CD5-、CD7-、CD8-、CD11b+(42.28%)、CD13+(65.35%)、CD14-、CD33+(99.45%),SKM-1/HHT为CD2-、CD3-、CD4-、CD5-、CD7-、CD8-、CD11b+(46.81%)、CD13+(83.37%)、CD14-、CD33+(99.61%)：R显带核型分析示耐药细胞与亲本细胞大体一致但有部分差异；细胞周期分布检测发现耐药细胞G1期细胞增多,S期和G2期细胞减少；两种细胞裸鼠成瘤率为0%；耐药细胞系与亲本细胞耐药谱分析比较,KM-1/HHT对HHT耐药为17.94倍,对长春新碱(Vincristine, VCR)、柔红霉素(Danuorubicin, DNR)、依托泊苷(Etoposide, VP-16)耐药指数分别为8.78倍、5.99倍、13.76倍；流式细胞仪检测耐药细胞内DNR荧光量明显低于亲本细胞；半定量real-time PCR示：耐药细胞系mdr-1表达显著增高(20.1倍),MRP轻度升高(3.56倍),topo-Ⅱa表达下降(1：0.619)。结论：建立了对HHT耐药的MDS转白血病细胞系SKM-1/HHT,其耐药机制主要涉及mdr-1的过度表达而导致的细胞外排增强,MRP及topo-Ⅱa的改变也可能部分参与了这一过程。