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目的:
探讨含表皮生长因子(EGF)的壳聚糖缓释微球(EGF—CMs)用于颌下腺组织工程的可行性和优越性。
方法:
体外组织块法原代培养3天龄SD大鼠的颌下腺细胞(RSMG—cell),免疫荧光法鉴定细胞来源并传代。
用乳化交联法制备含EGF的壳聚糖微球,扫描电镜观察其表面特性;ELISA法测定EGF的含量;计算微球载药量和包封率并绘制微球体外释药曲线
将EGF壳聚糖微球、壳聚糖微球、游离EGF分别加到浓度为4.0x104/mL的第2代颌下腺细胞中,作为实验组,同时单独将颌下腺细胞接种于培养板作为对照组。
培养1、3、5、7d,MTT法分别检测4组SD大鼠颌下腺细胞的增殖情况。碘-淀粉酶比色法测定淀粉酶含量,检测颌下腺细胞的分泌功能.用SPSS13.0软件包处理,分别以浓度和时间因素分组,作单因素多水平两两比较方差分析(Student—Newman—Keuls,S—N—K),检验水准a=0.05,P<0.05有统计学意义。
结果:
所制备的微球冻干粉剂为白色疏松粉末,无明显塌陷及萎缩现象。扫描电镜观察微球呈圆球体,粒径均匀,分散度良好。表面有较多微小孔隙(图2)。平均粒径为(58.62±3.42)μm。EGF—CMs载药量为24.2μg/g,包封率为60.2%。微球在释药初期具有”突释”效应,释药速度较快,3d后释放平稳,7d后大约释放71.3%,30d完全释放。
CMs组与对照组相比没有明显促进作用,EGF-CMs组和EGF组与对照组相比,EGF梯度含量在1~100 ug/L范围内均能促进RSMG—cell的增殖(P<0.05), EGF组和EGF—CMs组促进作用最强的EGF浓度均为10U g/L,EGF—CMs组各浓度水平间的比较(P<0.01),EGF组各浓度水平间的比较(P<0.05)。EGF—CMs组对RSMG—cell增殖的促进作用呈浓度依赖性(表1);当EGF浓度都为10μg/L时,作用3d内EGF组的促进作用高于EGF-CMs组(P<0.05),从第5d起,EGF-CMs组的促进作用明显高于EGF组(P<0.01),呈现时间依赖性(图8,图9)。
结论:
1.制备的EGF-CMs形态良好,并且具有较高的载药量和包封率,体外释药性较稳定。
2.EGF-CMs通过对EGF的缓释作用促进RSMG—cell增殖及唾液分泌的效果明显优于单独使用EGF。