血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠原位肝移植细胞保护和抗炎作用的实验研究

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目的 1、熟练掌握Wistar大鼠原位肝移植免疫耐受动物模型的建立,在此基础上建立DA→Lewis原位肝移植免疫排斥模型。2、探讨血红素加氧酶—1(HO-1)在诱导剂和抑制剂(CoPP、ZnPP)作用下,大鼠移植排斥模型中HO-1表达情况,探讨HO-1在大鼠肝移植排斥模型中对促炎症因子(IFN-γ,IL-12)和抑制炎症因子(IL-4,TGF-β1)的影响。3、通过大鼠肝移植排斥模型,观察HO-1不同表达对其术后肝功能的影响、肝组织内炎症细胞侵润以及排斥的严重程度(中性粒细胞,淋巴细胞情况)、凋亡因子Bcl-2和血管粘附因子(VCAM-1)等的变化。通过以上实验,试图了解血红素加氧酶—1(HO-1)对大鼠原位肝移植肝细胞保护和抗炎的作用。 方法 1、按改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植免疫耐受模型。2、同法建立大鼠原位肝移植排斥模型,将大鼠分为三组:对照组(A组),ZnPP组(B组)和CoPP组(C组)。三组分别于3天和7天处死,取血及肝脏标本。全自动化生化分析仪测定肝功情况;肝组织HE染色;免疫组化方法(SP)检测淋巴细胞及BCL-2的表达;髓过氧化酶染色(MPO)检测中性粒细胞的表达。3、实时荧光定量RT-PCR分析肝组织中HO-1、IFN-γ、IL-12、IL-4、TGF-β1、VCAM-1的表达。
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