两种离子液体功能化整体柱的制备及其色谱性能研究

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聚合物整体柱作为高效液相色谱的固定相,在蛋白质、多肽等生物大分子的分离和纯化中展现了与众不同的优势。然而,由于其内部结构不均匀,对蛋白质的选择性差等缺点,限制了其在复杂生物样品中蛋白质分离的进一步应用。本文将离子液体和铁卟啉引入到整体柱的制备中,旨在提高聚合物整体柱孔结构的均匀性和丰富色谱作用位点,从而改善柱效和提高选择性。首先,以离子液体(氯化1-烯丙基-3-甲基咪唑)和甲基丙烯酸十八烷基酯为二元单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,聚乙二醇200和异丙醇为二元致孔剂,通过原位自由基聚合法制备了基于离子液体的聚合物整体柱。通过扫描电子显微镜、氮吸附-脱附法和压汞法等方法对整体柱的内部形态和孔径分布进行了表征。结果表明,该整体柱具有较均匀的大孔结构,总的大孔比表面积为44.72m2 g-1。色谱表征结果表明:该整体柱对复杂生物样品,如鸡卵清和蜗牛酶中蛋白质具有良好的选择性和较高的柱效,尤其对于人血浆蛋白质组学研究中蛋白质的分级分离具有一定的应用价值。其次,为了进一步提高整体柱对蛋白质的选择性,以铁卟啉、离子液体(氯化1-烯丙基-3-甲基咪唑)和1,10-癸二醇二甲基丙烯酸酯为三元单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,聚乙二醇400和N,N-二甲基甲酰胺为二元致孔剂,通过氧化还原体系引发,制备了一种双功能化有机聚合物整体柱。扫描电子显微镜、氮吸附-脱附法和压汞法对整体柱的内部形态和孔径分布的表征结果表明该整体柱具有结构均匀的大孔结构。与上一实验相比,该双功能化的整体柱对人血浆蛋白质的选择性有了很大程度提高,能够得到21个达到基线分离的色谱峰。此外,经LC-MS技术对其中两个色谱峰所包含的蛋白质进行了鉴定,检测到多个未能在血浆中检测到的功能性肽段,表明了本方法对于人血浆蛋白的分级分离的有效性。
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