RNase P是一种核蛋白复合物，广泛存在于古细菌、细菌、酵母和动物体内，它可以特异性地剪切tRNA前体（ptRNA）的5’末端，形成成熟的tRNA。外部引导序列EGS（External guide sequence）能与mRNA形成RNase P识别的ptRNA分子的复合物，RNase P是结构识别酶，可对该复合物双链互补区域进行特异性切割。 人巨细胞病毒UL49基因的功能还没有被完全揭示，有研究人员根据其编码序列推断它是一种编码HCMV衣壳蛋白的基因，在病毒复制和繁殖过程中起重要作用。 本实验在张文军等人体外切割实验结果的基础上，依据类似的原则设计6个EGS（其中EGS6是阴性对照），并将其构建在pcDNA3.1-载体上，研究其对构建在真核载体pEGFP-Nl的UL49基因亚克隆片段表达的RNA的切割作用，为进一步研究以RNase P为基础的反义RNA技术抑制病毒基因表达奠定基础。 本论文进行了下列实验： 将所构建的6个EGS重组质粒分别与底物重组质粒Ul49-A-GFP共转染Hela细胞。首先通过Typhoon扫描荧光强度的变化初步判断EGS引导切割作用的效果及其合理用量。然后再通过流式细胞仪、荧光定量PCR等检测方法进一步对EGS的作用效果进行检测。实验结果表明所设计的5个EGS均有明显的引导切割作用，其中pDU6-EGS2具有相对显著的引导切割作用。 本实验在体外EGS引导切割实验基础上，进一步验证经体外筛选的EGS在胞内是否仍具有引导切割作用及其作用效果的强弱，同时为进一步研究UL49基因的功能以及以后的胞内病毒实验打下基础。在细胞水平检测到所设计的EGS能够引导RNase P对底物mRNA进行切割，证实了核酶技术在抗病毒方面的应用价值。