论文部分内容阅读
目的:研究 5-HT3 受体（5-hydroxytryptamine-3 receptor,5-HT3R）在三叉神经痛（trigeminal neuralgia,TN）模型大鼠三叉神经节（trigeminal ganglion,TG）中的表达变化及其疼痛调节机制。方法:（1）建立SD大鼠眶下神经慢性压迫性损伤模型（chronic constrictive injury to the infraobital nerve,CCI-ION）,采用 western blot、RT-qPCR 及免疫荧光染色方法检测大鼠TG中5-HT3R表达分布及造模前后变化。（2）采用电生理技术,记录三叉神经痛模型前后大鼠TG神经元5-HT电流变化。（3）通过生物信息学软件及RT-qPCR、FISH及双荧光素酶报告基因实验预测并验证可以调控5-HT3R表达的miRNA。（4）在体使用化学合成试剂,上调和下调miR-193a-5p的表达功能,采用行为学、western blot及电生理等研究其对5-HT3R的调控作用。（5）通过全转录组测序及small RNA测序及双荧光素酶报告基因实验预测并验证与 miR-193a-5p 结合的 lncRNA。（6）通过 RT-qPCR、行为学、western blot、电生理及在体使用慢病毒转染上调lncRNAXR595534.2的表达功能等方法检测lncRNA是否可以调控5-HT3R的表达。结果:（1）CCI-ION大鼠术后14d机械痛阈值降低,5-HT3R蛋白及mRNA表达显著升高。免疫荧光显示5--HT3R与IB4和CGRP有大量共标,与NF-200共标较少。（2）电生理结果显示CCI-ION大鼠TG神经元5-HT电流密度升高。（3）双荧光素酶报告基因实验验证miR-193a-5p可以调控5-HT3R表达。（4）CCI-ION大鼠TG中miR-193a-5p表达下调。在体上调CCI-ION大鼠miR-193a-5p的表达,5-HT3R蛋白表达下调,5-HT电流密度下降,大鼠机械痛阈值上升。在体下调CCI-ION大鼠miR-193a-5p的表达,5-HT3R蛋白表达上调,5-HT电流密度上升,大鼠产生机械痛敏现象。（5）双荧光素酶实验显示lncRNA XR595534.2与miR-193a-5p 结合。（6）lncRNAXR595534.2 在 CCI-ION 大鼠 TG 中表达上升。在体上调lncRNAXR595534.2表达和功能,引起5-HT3R蛋白表达上调,5-HT电流密度上升,大鼠产生机械痛敏现象。结论:CCI-ION 导致大鼠 TG 中 lncRNA XR595534.2 上调,结合 miR-193a-5p调控5-HT3R表达参与大鼠三叉神经痛调节。