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T细胞、NK细胞活化后,会产生干扰素-γ(IFN-γ),IFN-γ能够增强巨噬细胞和中性粒细胞的杀伤活性,具有抗病毒感染、抗肿瘤等生物学活性。血液和炎症部位IFN-γ含量的变化可作为评估机体细胞免疫功能的重要指标。目前未见有山羊IFN-γ单抗的研究报道,也未见相关的试剂盒。为制备山羊IFN-γ单克隆抗体,本研究以重组的山羊IFN-γ融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规细胞融合等单克隆抗体制备技术,筛选IFN-γ单抗杂交瘤,对IFN-γ单抗的特异性和亚型进行鉴定。研究结果如下: 1.免疫的3只BALB/c小鼠血清抗体效价均达到1∶105。 2.对融合的杂交瘤细胞进行筛选,获得了1株能够分泌IFN-γ单抗的杂交瘤细胞株(命名为3C),杂交瘤细胞的培养上清中抗体效价为1∶103,制备小鼠腹水后,测得抗体效价为1∶106。 3.IFN-γ单克隆抗体的类别为IgG1,κ型。 4.在Western blot试验中,IFN-γ单克隆抗体能与山羊IFN-γ重组蛋白发生特异性反应。 5.所获得单抗能特异性识别PBMCs分泌的天然IFN-γ,能与患有临床乳房炎的奶山羊乳汁中的IFN-γ发生特异性反应。 本研究获得了1株能够识别山羊IFN-γ的杂交瘤细胞,该杂交瘤细胞生长稳定,抗体分泌量高。