目的:设计和筛选有效抑制类泛素蛋白FAT10表达的siRNA序列,利用脂质体转染人肝细胞癌Hep3B细胞并研究对其生物学特性的影响。为进一步研究肝癌的发病及发生机制提供理论依据。方法:一、针对FAT10基因设计4条siRNA序列,并转染至人肝细胞癌Hep3B细胞,通过半定量RT-PCR、实时荧光定量PCR观察FAT10 mRNA表达下降的变化,筛选出最佳干扰片段及最佳干扰条件。二、转染入Hep3B细胞中,利用免疫细胞化学法检测FAT10蛋白变化情况。三、观察Hep3B细胞在FAT10基因表达变化后的细胞生物学特性变化,包括细胞计数法观察细胞生长抑制情况,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期变化情况。结果:一、脂质体转染FAM-siRNA后,倒置荧光显微镜下随机计数有绿色荧光的细胞,表明其有较高的转染效率。二、将siRNA转染Hep3B细胞后,通过半定量RT-PCR、荧光定量PCR及免疫细胞化学法检测,FAT10 mRNA及蛋白表达明显下调。三、降低FAT10基因表达后,Hep3B细胞生物学行为发生变化:Hep3B细胞生长受到明显抑制,Hep3B细胞的增殖受抑制并使其细胞周期阻滞于G0/G1期。结论: siRNA降低Hep3B细胞FAT10基因表达后,能抑制其细胞的生长,能为肝癌的发病、发生机制提供理论依据,并有可能成为肝癌的诊断、治疗及术后检测的靶基因。