【摘 要】
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小麦白粉菌(Blumeria graminis DC f.sp.tritici EO Speer)引起的白粉病是一种世界性病害,严重影响小麦的产量和质量。因此,发掘抗白粉病相关的小麦基因对粮食的安全生产有非常
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小麦白粉菌(Blumeria graminis DC f.sp.tritici EO Speer)引起的白粉病是一种世界性病害,严重影响小麦的产量和质量。因此,发掘抗白粉病相关的小麦基因对粮食的安全生产有非常重要的作用。植物中普遍存在着受体样蛋白激酶(Receptor-like kinase,RLK)膜蛋白家族,它们参与并显著影响着植物的生长发育和胁迫应答。根据植物受体样蛋白激酶所含结构域类型的不同,将RLK10受体样蛋白激酶归属于受体样蛋白激酶典型类型。它首先在小麦中被发现,在单子叶禾本科植物中被发现以多基因拷贝的形式存在。到目前为止,人们对单子叶植物中特有的RLK10类家族的研究还比较少,这类膜蛋白家族中的某些成员是否与抗白粉病有关将是本论文的重点研究对象。本课题利用实验室前期已经制备的含有RLK10类基因家族成员TdRLK1与TdRLK3的四倍体转基因小麦进行功能研究。对TdRLK1转基因材料白粉病抗性研究主要包括两个方面。1)利用特异引物对6份材料540棵四倍体小麦苗进行分子检测,筛选出含有NP::TdRLK1(gDNA)-GFP和NP::TdRLK1(cDNA)-GFP的四倍体转基因小麦,确定目的基因已经转入到四倍体小麦Stewart中。2)利用特异引物分别扩增白粉菌和白粉菌小种E09侵染的四倍体转基因小麦叶片进行定量Real-time PCR检测,获得分子检测病情指数(MDX)确定了含有NP::TdRLK1(gDNA)-GFP的转基因小麦要比含有NP::TdRLK1(cDNA)-GFP的转基因小麦对白粉病的抗性强,从而推断出TdRLK的内含子序列可能在该基因转录调控过程中发挥着重要作用。利用F2遗传群体分析TdRLK1、TdRLK3转基因材料对白粉病抗性的研究包括两个方面。1)利用特异引物对5个杂交组合的F2遗传群体的450棵小麦苗进行分子检测,筛选出含有TdRLK1-GFP、TdRLK3-GFP的转基因植株。2)通过离体接种白粉菌小种E09并使用荧光显微镜观察四倍体小麦叶片中白粉菌菌丝发育情况,筛选出W126*Pg12(转TdRLK1-GFP)F2和W126*Pg19(转TdRLK3-GFP)F2两个群体进行Real-time PCR检测。根据分子检测病情指数的差异,发现TdRLK1转基因表达导致的白粉病抗性比TdRLK3导致的白粉病抗性强,因此推测TdRLK10类受体样蛋白激酶参与了小麦对白粉病的抗性。
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