纳帕海噬菌体多样性的初步研究

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guanxinyang
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纳帕海是我国独特的低纬度高海拔季节性高原湿地,雨、旱两季分明,兼具水陆特征,是一个孤立而分散的生态系统,其中大量存在的噬菌体是维持湿地微生物生态系统平衡最重要的生物因子之一,因此对其进行系统地研究无疑具有重要意义。但除对纳帕海湿地的动植物研究有所报道外,关于纳帕海湿地噬菌体的研究罕见报道。本研究通过可培养和免培养技术对纳帕海湿地的噬菌体多样性进行了初步研究。从2011年旱季纳帕海湿地(E99°37’31",N27°53’37")水样中分离并初筛纯培养的细菌71株,以它们为宿主分离到可培养的噬菌体23株。对其中的一株温和气单胞菌NPH-1及其噬菌体的生理、生化等生物学特征进行了较系统的研究。利用荧光显微镜和流式细胞技术检测了 2013年纳帕海水样和土样中免培养噬菌体的丰度,实验表明5月份采集的水样和土样中噬菌体丰度范围分别为1.32×106~3.69×106/ml和2.05×106~4.97×107/ml。12月份的水样和土样中噬菌体丰度范围分别为 1.35×106~3.54×106/ml 和 3.85×106/m1~2.21×107/ml。在 5 月和 12 月采集的样品中,土样表层噬菌体丰度最高,变化最剧烈,其中湿地土样的噬菌体丰度最高。通过SPSS检验,发现噬菌体丰度在各季节间没有显著性差异,但与叶绿素a、总氮和钾呈正相关,与pH呈负相关,而与其他已检测的环境因素无显著相关性。用噬菌体保守基因g20、DNA polymerase和g23的简并引物扩增免培养噬菌体基因组进行了噬菌体多样性检测。结果表明:在2013年旱季纳帕海湿地采集的水样(E99°37’22",N27°53’32")扩增到的克隆序列中,g20基因引物扩增产物能与地理分布广泛的多种稻田噬藻体序列聚类,表明就噬藻体的分布而言,纳帕海湿地噬菌体具有丰富的多样性;DNA polymerase基因引物扩增产物仅能与一种柄杆菌属的噬菌体序列聚类且克隆数少,而余下的产物聚类为四簇,均为未知序列,有可能是纳帕海湿地独有的噬菌体类群;g23基因引物扩增到的产物,一部分能与T4类噬菌体聚类,而其余未知的序列可以聚类为两簇,且与目前已知的噬菌体序列进化距离甚远,可能为新的噬菌体类群。本研究通过纯培养法在纳帕海分离得到多株低温菌及其噬菌体,对其中一株进行了较系统的分析;利用荧光显微镜和流式细胞仪技术对纳帕海的噬菌体丰度进行了检测;通过分子标记技术对噬菌体的多样性进行了检测,发现纳帕海湿地存在大量未知噬菌体,多样性丰富,为进一步研究提供了参考。
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