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目的:研究聚酰胺亲和膜包对肾透析病人体内外内毒素的去除、肾透析所用的反渗水、碳酸氢盐透析液(A液)、204透析液(B液)、管道、人用白蛋白、血浆等在不同的流速、浓度、温度条件下对内毒素去除的影响效果,以便改进目前临床透析过程并降低病人的经济负担。方法:一、聚酰胺亲和分离膜包的制备:制备Nylon-NH-CHOH-(CH2)3-CHOH-NH-(CH2)6-NH-CH2-CHOH-CH2-Histidin(组氨酸)。使琼脂糖交联及活化,连接间隔臂己二胺,使成产品AH-SepharoseCL-4B。再使配基固截化和介质再生。二、消毒方法:(一)玻璃器具消毒:在可控硅电炉中300℃下消毒40分钟,自然冷却后当天使用。(二)管道及膜分离器的消毒:乳胶管采用煮沸15分钟消毒。三、标准内毒素溶液的配制:将内毒素工作标准品用内毒素检查用水配成不同浓度的溶液。四、吸附方法:(一)静态吸附法:称取干重15mg膜,置于2mL无热原内毒素检查用水中,间断振荡,放置2小时,吸上清液,测定内毒素浓度,通过吸附前后的浓度计算去除率。(二)动态吸附法:将30张的聚酰胺膜装入膜分离器中,用蠕动泵对含内毒素溶液以四种流速流经膜分离器,收集膜包前后样品,定时,定温条件下,测定内毒素含量,以确定膜包对内毒素的去除情况。五、聚酰胺亲和膜包对透析液中内毒素的去除(一) A、B液离子含量测定:用钙紫红素指示剂测定溶液中的CaCl2;用洛黑T指示剂测定溶液中的MgCl26H2O;用溴酚蓝指示剂测定溶液中的KCl;用醋酸银指示液测定溶液中的NaCl;用酚酞指示剂测定溶液中的醋酸钠;采用旋光度法测定溶液中的葡萄糖含量。(二)膜包对透析液在固定离子、pH的条件下去除内毒素:用鲎试剂法检测膜包对透析液在不同流速(5、10、15、20ml/min)的条件下对内毒素的去除率及各离子的改变情况。六、管道内毒素测定方法:按国家标准,管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器具内腔,供试品储存不超过2小时。七、聚酰胺亲和膜包对白蛋白溶液中内毒素的去除方法:把人用白蛋白以10倍稀释,经膜包在流速为5ml/min,25℃条件下滤过,检测白蛋白的截流情况,及前后内毒素的去除情况。八、聚酰胺亲和膜包对血浆中内毒素的去除方法:取病人血浆,以10倍稀释,在不同流速下对比膜包前后内毒素含量,计算收率,并检测膜前膜后白蛋白的含量。九、内毒素定量测定:(一)内毒素含量标准曲线的制备:应用BET-16细菌内毒素测定仪进行测定,浓度为7.0、1.75、0.875、0.438、0.219、0.109、0.055、0.014EU/ml的内毒素标准系列水溶液。仪器可根据凝集时间的对数(lgT)对细菌内毒素浓度的对数(lgC)制定标准曲线。(二)鲎试剂灵敏度复核试验:每批鲎试剂初次使用前,需对其标示的灵敏度进行复核。合格者可供细菌内毒素检测。结果:1.流速在5ml/min、10ml/min、15ml/min、20ml/min时,反渗水溶液(含内毒素4.000 EU/ml)中内毒素的去除率分别为82.3%、80.6%、79.8%、79.2%,在5ml/min时去除率最高,随着流速的增加,内毒素去除率有下降的趋势。内毒素浓度为4.000 EU/ml的血浆在流速5ml/min、10ml/min、15ml/min、20ml/min条件下,内毒素的去除率分别为87.6%、86.1%、83.4%、79.3%。在5ml/min时去除效果最佳,随着流速的增加,内毒素去除率有所下降。2.温度在15℃、25℃、37℃条件下,反渗水内毒素的去除率分别为88.8%、89.5%、89.9%,可见温度对水溶液中内毒素的去除影响不明显,随温度的升高,去除率稍有上升。3.聚酰胺亲和膜包在流速为5ml/min,温度为25℃条件下,对不含人血白蛋白(HAS)水溶液中内毒素的去除率,静态法为89.6%,动态法为98.4%;加入HAS水溶液中内毒素的去除率,静态法为81.2%,动态法为86.6%。可见白蛋白影响了水溶液中内毒素的去除。蛋白回收率,静态法为85.8% ,动态法为93.8%,说明聚酰胺亲和膜包对HAS吸附性很小。4.对病人血液透析液流经的管道,按国家标准在37℃条件下保温1小时,收集滤液,其内毒素值为:静脉管5.36EU;动脉管3.855EU。符合国家标准。结论:聚酰胺亲和膜包,以组氨酸为配基,合成了以琼脂糖为基质的膜介质,并带有一定长度的间隔臂。此介质可有效去除水、透析液、血浆和白蛋白等液体中内毒素,且可较高的保留各种物质的有效成分。