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泛素化和去泛素化是重要的表观遗传调控方式,Ubp-M通过对组蛋白H2A去泛素化修饰,来调控基因的转录活性,而且还能够影响细胞周期进程。研究表明,细胞进入有丝分裂期Ubp-M磷酸化水平会显著升高,伴随着细胞分裂从中期向后期过渡,其磷酸化水平会降低。但是磷酸化对于Ubp-M的功能影响,Ubp-M上的磷酸化位点以及催化Ubp-M的磷酸激酶并不清楚。研究表明,参与细胞周期调控的蛋白激酶CDK1可能催化Ubp-M磷酸化,CDK1发挥激酶活性调控细胞周期是在分裂期,与Ubp-M在细胞周期中被磷酸化的时间相吻合。在本论文中,质谱鉴定发现Ubp-M上有4个位点可以被磷酸化,其中第552位丝氨酸是主要的磷酸化位点。通过体内和体外的激酶活性实验,证明CDK1是在细胞分裂期催化Ubp-M第552位丝氨酸磷酸化的蛋白激酶。为了进一步探究Ubp-M第552位丝氨酸磷酸化(Ubp-M S552P)的功能,我们利用真核细胞表达出带有FLAG标签的野生型Ubp-M和两个第552位丝氨酸位点突变体(S552A和S552E)。发现Ubp-M第552位丝氨酸的突变体对Ubp-M的底物特异性、去泛素化酶活性和对基因表达的调控功能并没有影响。但是Ubp-M S552P对于维持正常的细胞增殖和调节细胞周期中G2期向M期转换有重要作用。此外,Ubp-M S552P能够调控Ubp-M与核输出蛋白CRM1的相互作用。综上所述,当细胞即将进入分裂期时,CDK1激酶催化Ubp-M磷酸化。S552P对于Ubp-M的去泛素化酶活性和调控基因表达的功能并不是必需的,而对于维持正常的细胞增殖和调节细胞周期进程具有重要作用。S552P阻断了 Ubp-M与CRM1之间的相互作用,使Ubp-M在细胞核内积累,催化组蛋白H2A去泛素化,从而调控染色质结构和细胞周期进程。