转染Noggin基因的骨髓基质细胞在体外分化为神经元样细胞的初步研究 [目的] 脑卒中是神经系统的常见病、多发病，其致残率和病死率均很高。脑卒中治疗的关键是重建神经通路，重建神经通路的前提是有新生神经细胞的发生。成年哺乳动物脑内神经干细胞的发现，给脑卒中的治疗带来了新的曙光。但神经干细胞的组织来源一直是这一研究领域最棘手的问题。 骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSC)，是存在于骨髓基质中一种成体干细胞，来源于中胚层，具有很强的自我增殖和多向分化能力，可以分化为多种不同的组织细胞，是组织工程学研究中的一种理想种子细胞。目前国内外研究报道骨髓基质细胞在体内外可被诱导分化神经细胞，如骨髓基质细胞可以被化学物质如视黄酸、β-巯基乙醇，中药如黄芩甙、天麻等诱导分化为神经细胞。但是利用胚胎发育过程中的神经诱导蛋白—Noggin蛋白对骨髓基质细胞诱导分化的研究在国内尚属空白。 Noggin基因是1992年California大学的Harland，R．M．和Smith，W．C．从非洲爪蟾的胚胎中分离出来的，在胚胎发育中有重要神经诱导作用，尤其是诱导外胚层的背侧发育。作为一种内源性神经诱导信号，它的作用不仅局限于胚胎期，在成年哺乳动物中枢神经系统也可检测到noggin基因的表达。另外它还参与其他组织的发育过程，如心脏中隔的形成和关节软骨的形成。 因此，本研究拟通过克隆并构建一个Noggin基因的表达载体，初步探讨转染Noggin基因的骨髓基质细胞在体外分化为神经细胞的情况，为下一步进行骨髓基质细胞的神经移植或基因治疗打下基础。 [方法] 1．用Percoll淋巴细胞分离液分离出大鼠骨髓基质细胞，并用含20％(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液培养，胰酶消化传代，扩增大鼠骨髓基质细胞。 2．应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术，从正常人胎脑组织中扩增出Noggin基因，利用基因工程技术将其与质粒pCS2+[Tα1]-GFP连接，构