无核葡萄育种与生产是当今世界鲜食葡萄与制干的重要目标,目前世界上主栽的无核葡萄品种,果实性状优良但抗寒性差。无核葡萄在寒冷地区栽培时易发生冻害,不仅造成生产埋土成本高,还使葡萄的产量和质量下降,因此,选育一批无核抗寒葡萄的品种,是进一步扩大葡萄栽培范围与预防冻害的有效措施。本研究以优质的欧洲无核葡萄品种为母本,以抗寒性强的中国野生山葡萄的后代欧山品种及其它抗寒材料为父本,共配置16个杂交组合与1个自交组合。利用胚挽救技术对杂种胚珠进行离体培养,对胚发育的培养基成分进行优化,用无核分子标记和抗寒分子标记对杂种后代性状进行鉴定。结果如下:1、获得无核抗寒新种质:在16个杂交组合与1个自交组合中,获得了6319个胚珠,1455个发育胚,胚挽救杂种苗416株;其中‘红宝石无核’ב北冰红’胚挽救效果最好,胚发育率达56.29%,成苗率最高达21.92%。2、胚挽救幼果取样时期的确定:‘克瑞森无核’和‘火焰无核’作为杂交母本,‘左优红’作为父本,确定杂交幼果最佳取样时间,设置5个取样时间点,分别在授粉后37 d、39 d、41 d、43 d和45 d采取杂交幼果。‘克瑞森无核’ב左优红’在盛花期后43 d取样培养时成苗率最高,为2.6%。‘火焰无核’ב左优红’在盛花期后41 d接种培养时,胚发育率和成苗率达到最高,分别为26.7%和6.7%。3、MM3胚发育培养基添加氨基酸的优化:以MM3为基础培养基,分别添加1mmol·L-1、3 mmol·L-1和6 mmol·L-1的谷氨酰胺和苯丙氨酸。‘红宝石无核’ב北冰红’在MM3+3 mmol·L-1谷氨酰胺培养基中培养时效果较好,胚发育率达69%,成苗率达32%;高于对照组的胚发育率（49%）和成苗率（29%）。‘波尔莱特’ב北冰红’在MM3+3 mmol·L-1谷氨酰胺培养基中培养时效果较好,胚发育率为20%,成苗率为5%。高于对照组的胚发育率（8%）和成苗率（1%）。‘木星’ב木星’在MM3+6mmol·L-1谷氨酰胺的培养基中培养时效果较好,胚发育率为62%,成苗率为28%;高于对照组的胚发育率（42%）和成苗率（8%）。在添加不同浓度的苯丙氨酸的胚发育培养基中培养时,胚发育和成苗效果不理想。4、无核抗寒胚挽救杂种后代分子标记早期辅助选择:无核分子标记SCF27-2000检测6个杂交组合的111个株系,其中64个株系携带无核特异性条带;用抗寒分子标记S241-717和S238-800检测出70个株系携带有抗寒特异性条带。共获得无核抗寒株系46个。5、无核抗寒胚挽救杂种后代植株抗寒基因表达分析:用抗寒基因Va CBF1、Vv COR27和Va ERD15对其进行抗寒基因表达分析。分别设置24℃、16℃、8℃、4℃和0℃,5个温度梯度,依次进行低温处理,每个梯度的处理时间为24 h。抗寒基因Va CBF1和Vv COR27在‘红宝石无核’ב北冰红’和‘红宝石无核’ב雪兰红’杂交子代的抗寒植株中的表达量高于在不抗寒植株中的表达量;抗寒基因Va ERD15在抗寒植株中的表达量低于在不抗寒植株中的表达量。综上所述,本研究配置了16个杂交组合与1个自交组合,共获得胚挽救株系416株。用分子标记辅助选择技术对杂种后代进行无核性状和抗寒性状检测,64个株系携带无核性状,70个株系携带抗寒性状。无核葡萄品种作母本比较,以‘红宝石无核’最适宜作杂交母本。‘克瑞森无核’ב左优红’和‘火焰无核’ב左优红’的杂交幼果最佳采取时期分别为盛花期后43 d和41 d。胚发育培养基MM3+3 mmol·L-1谷氨酰胺或MM3+6 mmol·L-1谷氨酰胺作为胚发育培养基效果较好。三个有关抗寒相关基因Va CBF1、Vv COR27和Va ERD15差异表达分析表明,Va CBF1、Vv COR27在‘红宝石无核’ב北冰红’和‘红宝石无核’ב雪兰红’抗寒株系中的表达量均高于不抗寒株系。