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研究背景: 登革病毒(Dengue virus，DENV)感染可以导致登革热。由于DENV致病机制尚不完全清楚，延缓了治疗方法的开发。目前尚未批准任何特异性抗DENV药物应用于临床，已有的抗其它病毒药物抗DENV的效果不理想。因此寻找新的抗DENV策略是非常必要的。有研究发现，在细胞被DENV感染以前预先用干扰素处理，可以有效抑制DENV感染及病毒在细胞内复制;但是在细胞被DENV感染以后再加入干扰素则不能发挥抗病毒作用，提示DENV感染导致病毒耐受干扰素，但具体的机制尚不清楚。同时有研究显示，在DENV感染的患者外周血单核细胞和DENV感染的体外细胞模型中，泛素特异性蛋白酶18(USP18)的表达水平显著升高。USP18是Ⅰ型干扰素信号传导通路负调控因子，它通过与干扰素受体亚基（IFNAR2）结合，抑制干扰素诱导的Jak/STAT信号通路的传导。本实验室前期研究发现，在对干扰素治疗不敏感（治疗无效）的丙肝病毒感染者治疗前肝组织内USP18表达水平明显升高;抑制USP18表达显著增强干扰素抗HCV活性，提示USP18在HCV耐受干扰素中发挥非常重要的作用。USP18对DENV复制是否有影响以及与DENV拮抗Ⅰ型干扰素抗病毒活性（耐受干扰素）是否存在关联，目前尚不清楚。 研究目的: 1.研究USP18对DENV-2复制的影响及其机制 2.研究USP18在DENV-2耐受干扰素中的作用及机制 研究内容及方法: 1.通过DENV-2感染Hela细胞，干扰素受体缺失的U5A细胞及其母细2fTGH，检测细胞内USP18的表达，明确DENV-2感染诱导USP18的表达是否依赖内源性干扰素的激活; 2.通过在Hela细胞中高转USP18或通过siUSP18抑制USP18的表达，再感染DENV-2，检测USP18对DENV-2复制的影响; 3.Hela，2fTGH和U5A细胞转染siUSP18，感染DENV-2后加入IFNα，检测敲低USP18后IFNα对DENV-2复制的影响; 4.Hela细胞转染siUSP18，感染DENV-2后加入IFNα，通过Western blot检测Jak/STAT信号通路中信号转导和转录因子（STAT1）的磷酸化水平;通过双荧光报告基因检测干扰素刺激反应原件(ISRE)活性的变化;并通过实时荧光定量PCR对干扰素刺激基因(ISG)的表达水平进行检测; 5.构建表达DENV-2病毒蛋白的质粒并在293T细胞中高表达，通过免疫共沉淀法筛选与USP18相互作用的病毒蛋白。 研究结果: 1.DENV-2感染Hela，2fTGH和U5A细胞后均能诱导USP18表达，提示DENV-2诱导USP18表达不完全依赖干扰素的激活; 2.在Hela细胞中高表达USP18促进DENV-2复制，敲低USP18抑制DENV-2复制; 3.敲低USP18的Hela和2fTGH细胞感染DENV-2后加入IFNα，IFNα可以抑制DENV-2的复制; 4.敲低USP18可以促进STAT1的磷酸化、增强ISRE活性、刺激ISGs的产生; 5.USP18与DENV-2的E、NS1和NS3蛋白存在相互作用。 研究结论: 研究结果表明USP18在DENV-2感染及干扰素耐受中起着重要作用。DENV-2感染诱导USP18的表达，可以不依赖内源性IFN-Ⅰ介导的Jak/STAT信号通路。高表达USP18可以促进DENV-2复制，敲低USP18抑制DENV-2复制。USP18高表达拮抗IFNα的抗DENV-2活性，导致病毒耐受干扰素;敲低USP18的表达通过激活Jak/STAT信号通路营救IFNα抗DENV-2的活性。同时，USP18与病毒蛋白E、NS1、NS3存在相互作用，USP18可能通过与病毒蛋白相互作用调控病毒复制，具体的机制还需要进一步深入研究。